目的体外构建EGFR基因的小干扰RNA（siRNA）质粒,转染人卵巢癌细胞株skov3后检测RNA干扰（RNAi）对EGFR基因mRNA及蛋白表达水平、细胞的体外生长活性及细胞对化疗药物敏感性的影响。方法根据EGFR mRNA序列设计特异性小发卡状RNA（shRNA）插入序列,体外合成该序列后将其定向克隆入线性化质粒pSilencer^TM 2.1-U6 neo,利用DNA测序证明插入序列的正确性。利用HifectinⅡ真核转染试剂将重组质粒转染至skov3细胞中。实验分为三组:正常对照组;非特异性转染组和EGFR shRNA转染组。利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫细胞化学（ICC）方法分别鉴定转染前后EGFR基因在mRNA和蛋白水平表达的变化;利用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）测定转染前后细胞增殖活性的改变以及细胞对顺铂敏感性的变化。结果双向重复DNA测序证实EGFR质粒表达载体中shRNA插入序列完全正确。RT-PCR和ICC的结果也证明此表达载体可特异性抑制EGFR基因的表达,EGFR shRNA转染组细胞EGFR mRNA的表达与其他两组相比明显减弱（F=87.73,q=1.50～16.81,P＜0.01）;EGFR蛋白表达亦明显下调（F=69.29,q=1.14～14.71,P＜0.01）;细胞的增殖活性受到抑制,生长缓慢,与正常对照组相比,第五天的抑制率达到30%;体外培养的细胞对顺铂敏感性比正常对照组提高了约3倍。结论利用RNAi技术设计并体外合成靶向EGFR的序列特异性shRNA转染人卵巢癌细胞株skov3细胞后可有效抑制skov3细胞中EGFR基因在mRNA和蛋白水平的表达,同时可以抑制skov3细胞的体外生长活性,增强skov3细胞对顺铂的敏感性。