论文部分内容阅读
目的：建立IS6110-限制性片段长度多态性基因分型技术(IS6110-RFLP)、牛分枝杆菌数目可变串联重复序列(VNTR)基因分型技术及GTG-聚合酶链式反应(GTG-PCR)基因分型技术；评测建立的三种基因分型技术的分辨效果，选择适用于牛结核病分子流行病学调查研究的最佳基因分型方案。
方法：选用宁夏和周边地区菌株19株、哈尔滨兽医研究所、新疆等地的牛分枝杆菌临床分离菌株，以及结核分枝杆菌标准株H37Rv和牛分枝杆菌标准株AF2122/97共计30个样本；用这30个样本对二种方法的分型效果进行评测。
结果：(1)牛结核杆菌临床菌株对IS6110-RFLP评测结果显示，该方法对牛分枝杆菌的分辨力有限，不适合作为牛结核流行病学调查的一线方案使用；(2)用30个牛结核临床样本对3组具有不同等位基因多样性(h)的VNTR位点组合的分型情况进行评测，统计数据表明，以h＞0.600的12个VNTR位点组合的菌株分辨指数达到0.997，成簇百分比仅为3.3％，可将样本分为29个类型，与同时使用24个VNTR位点组合的分辨能力相当；(3)经过对4组TRS序列的筛选，确定以(GTG)5作为引物对30个样本进行了扩增，经过电泳分析，结果统计、计算得出GTG-PCR法的分辨指数达HGI=0.991，成簇百分比为15.3％，可将上述30个样本分为26个类型，与VNTR法的分辨率相差不人。
结论：实验选取的12个VNTR位点组合分型法在分辨能力、实验操作要求等方面均具有很好的优势，推荐作为牛分枝杆菌分子流行病学调查时的一线分型方案；IS6110-RFLP对牛结核临床株的分离效果有限，不适合作为分子流行病学调查研究的一线方法使用；GTG-PCR法在对30个样本进行的基因多态性分析中取得了较好的分离效果，但其分辨能力仍需要更多的样本来做进一步证实。