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目的通过沉默Wnt/β-catenin信号通路的核心蛋白β-catenin,探讨其与肾纤维化的关系,为慢性肾脏病的治疗提供理论依据。方法1、根据sh RNA设计原则,设计针对β-catenin基因的有效靶点,构建β-catenin基因特异性si RNA慢病毒载体,并用293T细胞转染法测定慢病毒滴度。2、设计四组(N=3)不同剂量的阴性慢病毒浓缩液,剂量分别为1×105 ifu、1×106 ifu、1×107 ifu、1.5×107 ifu,分别注射于大鼠肾脏被膜下,3天后杀鼠取新鲜肾组织制作冰冻切片,观察慢病毒的感染效率,为后续实验摸索注射的最佳剂量。3、128只雄性SD大鼠(8周龄、200-250g)随机分为4组:①模型组(UUO组,N=32);②假手术组(Sham组,N=32);③β-catenin基因沉默组(沉默组,N=32);④阴性沉默组(阴性组,N=32)。分别于术后第3、7、10、14天每组各处死8只大鼠,收集肾组织标本,通过HE染色、Masson染色观察肾组织形态及肾纤维化改变;通过免疫组织化学染色检测α-SMA和β-catenin蛋白的表达部位;以及Western blot及RT-PCR技术检测α-SMA、β-catenin蛋白及m RNA的表达量。结果(1)成功包装和浓缩慢病毒,在荧光显微镜下可见病毒颗粒发出强的绿色荧光,滴度为2×108TU/ml。(2)冰冻切片:带有荧光(GFP)的阴性慢病毒si RNA感染相应部位的组织细胞,以滴度为1×107 ifu时感染效率最高。(3)肾组织HE及Masson染色:UUO组大鼠随梗阻时间的延长,出现皮质区肾小管扩张、变形,间质水肿、增宽,并可见炎症细胞浸润,后期出现肾小管不同程度闭塞、萎缩或扩张呈囊状、管腔塌陷,并可见程度不等的间质纤维化改变。Sham组大鼠肾皮质结构未见异常改变,未见明显纤维化改变。阴性沉默组改变与UUO组类似,而沉默组大鼠肾小管结构于四个时间点出现不同程度的损伤,伴随不同程度的间质纤维化改变,在后期同相应时间点的阴性组相比有所减轻。(4)免疫组织化学染色:随梗阻时间的延长,UUO组表达α-SMA和β-catenin蛋白的肾小管上皮细胞数目增多;Sham组无明显变化。沉默β-catenin基因后,表达α-SMA和β-catenin蛋白的肾小管上皮细胞的数目均在第10天、第14天较相应时间点的阴性沉默组减少。(5)Western blot:①与相应时间点的Sham组相比,UUO组大鼠肾皮质区α-SMA蛋白于第10、14天升高(P<0.05);沉默β-catenin基因后,与相应时间点的阴性沉默组相比,第10、14天下降(P<0.05);②与相应时间点的Sham组相比,UUO组大鼠肾皮质区β-catenin蛋白于第7、10、14天升高(P<0.05);沉默β-catenin基因后,与相应时间点的阴性沉默组相比,第10、14天下降(P<0.05);(6)RT-PCR:①与相应时间点的Sham组相比,UUO组大鼠肾皮质区α-SMA m RNA于第10、14天升高(P<0.05);沉默β-catenin基因后,与相应时间点的阴性沉默组相比,第10、14天下降(P<0.05);②与相应时间的Sham组相比,UUO组大鼠肾皮质区β-catenin m RNA于第7、10、14天升高(P<0.05);沉默β-catenin基因后,与相应时间点的阴性沉默组相比,第14天下降(P<0.05)。结论①Wnt/β-catenin信号通路参与肾小管上皮细胞转分化。②特异的β-catenin si RNA可以明显下调UUO模型大鼠肾脏β-catenin蛋白的表达。③β-catenin si RNA可使UUO模型大鼠肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化程度减轻。