芒萁抑菌有效成分的提取及抑菌机理研究

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近年来,具有抗菌活性物质的植物不断被人们发现,基于植物抑菌成分开发成天然防腐剂和天然抑菌药物受到人们广泛的关注,但由于材料的获取多属于名贵中草药或植物精油,由于名贵中草药的成本高,大大限制了其发展。而芒萁具有资源丰富、获取廉价等特点。本文以芒其为研究对象,采用乙醇浸提法提取抑菌物质,并对提取工艺进行正交优化,优化得到的提取工艺是浸提温度40℃、浸提时间2h、乙醇的体积分数40%,固液比1:35,在此工艺下芒萁对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径达11.50mmo对芒其中抑菌有效成分的且影响因素的大小为为温度>浸提时间>固液比>乙醇体积分数,其中提取温度对抑菌有效成分的提取影响最大。在最佳提取工艺的基础上采用萃取、硅胶柱、凝胶柱分离的顺序对具有抑菌有效成分筛选后进行分离纯化,得到的抑菌目标物质为经凝胶柱分离后的组分6,经高效液相鉴定其纯度达99%以上。经抑菌实验在其浓度为0.5mg/ml时对金黄色葡萄球菌的抑菌圈大小为13.30mm。比分离前的乙酸乙酯层在1.0mg/ml对金黄色葡萄球菌的抑菌圈大,且在相同浓度下比常用防腐剂山梨酸钾的抑制活性高。然后采用化学反应识别、红外谱图和核磁共振谱图对H标物质的结构和类型进行出探讨发现目标物质可能是属于缩合鞣质类化合物,并带有糖苷键。且目标物质相刘分子量在800-1000左右。通过测定金黄色葡萄球菌的生长曲线的测定、SDS-凝胶电泳测定对蛋白的破坏情况、AnnexinV-FITC/PI双标记测定细胞凋亡率、扫描电镜观察细胞结构等手段初步探讨了目标物质的抑菌机理,得到抑菌目标物质抑菌主要作用方式是通过作用于细胞对数期的胞体蛋白导致细胞膜溃烂,细胞骨架坍塌而凝结成块状,最终导致细胞的瓦解,来达到抑制细菌的生长的目的。本研究通过对芒其对金黄色葡萄球菌的目标成分的分离和抑菌机理的初步探讨,为芒萁的进一步的开发,提供了一定的理论基础。
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