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多糖不仅是构成生物有机体的基础物质之一,而且在许多基本生命过程中发挥极为重要的作用。中药多糖是中药活性成分中重要的组成部分,目前研究发现其具有免疫增强、抗肿瘤抗病毒及其他功能,抗氧化作用是其发挥前述功能的主要原因之一。中药的使用一般通过复方组合获得良好的治疗效果,其中来源于不同中药的多糖具有不同的抗氧化作用,为了更好的研究中药多糖的相互作用,我们将不同的中药多糖按照一定比例组成复合多糖(PM),研究PM进入机体后的的抗氧化作用及其可能的机制,为中药复方多糖的开发利用提供一定的依据。本研究从枸杞、黄芪、红枣三种中药中提取多糖成分,对枸杞多糖(LBP)、黄芪多糖(APS)、红枣多糖(JPS)多糖按照一定比例组成的复合多糖进行相关抗氧化活性研究。通过体外清除自由基、体外细胞抗氧化活性实验,比较和评估了单味多糖与复合多糖的抗氧化活性差异,并通过氧化损伤小鼠模型检测多糖的体内抗氧化作用,试图研究多糖的体外和体内的抗氧化活性及其可能的机制。本课题主要研究方法及结果如下:1.通过水提醇沉法,Sevag法除蛋白杂质,透析法除去小分子杂质,冷冻干燥后得到枸杞多糖、黄芪多糖、红枣多糖三种中药多糖。多糖样品采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化单糖,进行液相色谱鉴定。实验结果显示,枸杞多糖、黄芪多糖、红枣多糖得率分别为1.5%、1.3%和1.1%;苯酚硫酸法检测总糖含量分别为38.5%、28.4%和43.3%;通过液相色谱法对三种多糖的单糖组成进行分析,表明枸杞多糖、黄芪多糖、红枣多糖均主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、岩藻糖7种单糖和半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸等组成。2.将枸杞多糖、黄芪多糖、红枣多糖及其复合多糖进行DPPH自由基清除、超氧阴离子自由基清除、羟基自由基清除和还原能力等抗氧化检测,建立过氧化氢氧化损伤的LO2(人正常肝细胞)和HepG2(人肝癌细胞)模型,细胞与多糖共孵育后使用MTT法检测细胞活力。过氧化氢氧化损伤LO2和HepG2细胞加多糖处理后分别检测其丙二醛(MDA)水平,超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性。实验的结果显示,枸杞多糖、黄芪多糖、红枣多糖及其复合多糖均具有良好的体外抗氧化活性,但弱于同浓度下的抗坏血酸(VC)。建立5μmol/L和50μmol/L H2O2 LO2细胞和HepG2细胞损伤模型;在氧化损伤的细胞模型中,80μg/mL和160μg/mL复合多糖分别作用两种细胞模型时,LO2细胞和HepG2细胞存活率最高,说明低浓度的复合多糖对细胞有较好抗氧化作用;三种多糖及其复合多糖均能显著降低细胞MDA水平,SOD和GSH-Px活性明显升高,说明均具有一定的抗氧化作用,其中复合多糖在较低浓度时对氧化损伤的细胞有较好的保护作用。3.采用四氯化碳进行小鼠急性肝损伤造模,研究多糖在抗氧化和保护肝脏的功效。对血清白蛋白(Alb)、谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)活性进行测定。从MDA含量水平、SOD、GSH-Px和CAT(过氧化氢酶)等相关酶活力探讨多糖抗氧化发挥肝保护的相关机制。结果显示,复合多糖低剂量组(PML)、复合多糖中剂量组(PMM)、复合多糖高剂量组(PMH)和枸杞多糖、黄芪多糖、红枣多糖给药组不同程度的升高肝损伤小鼠血清中的Alb含量,不同程度的降低肝损伤小鼠血清中的ALT和AST活性;能显著降低MDA含量,提高SOD、GSH-Px和CAT酶活性,其中复合多糖低剂量组效果最明显,说明多糖组可能是通过提高体内抗氧化酶防御体系,减少自由基的过度累积,从而发挥抗氧化作用,较低剂量复合多糖即显示了良好的抗氧化作用。