目的：探讨灵芝多糖对抗H2O2诱导的HDF细胞衰老作用及其可能的细胞周期调控机制。 方法：将HDF细胞培养至24代时分成六组：即青年组、对照组、衰老组(H2O2衰老模型组)，灵芝多糖小剂量(50mg/L)、中剂量(100mg/L)和高剂量(150mg/L)组。进行体外常规培养，各灵芝多糖组细胞从24代开始加灵芝多糖。各灵芝多糖组和衰老组自30代开始每2代加50μlH2O2，直至培养到38代。观察细胞形态，采用MTT法检测细胞活力；免疫组化法检测β-半乳糖苷酶活性；RT-PCR法检测P16INK4a(P16)、cyclinD1、CDK4的表达;采用westernblot法检测Rb蛋白表达和磷酸化Rb。 结果：与青年组及对照组细胞比较，衰老组细胞活力下降，β-半乳糖苷酶活性升高，cyclinD1mRNA表达升高(p＜0.01)，CDK4mRNA表达下降(p＜0.01)，P16蛋白表达升高(p＜0.01)，Rb磷酸化减少(p＜0.01)；与衰老组细胞比较，中剂量和大剂量灵芝多糖细胞活力明显提高，而β-半乳糖苷酶活性降低，cyclinD1mRNA表达降低，CDK4mRNA表达升高，P16蛋白表达降低，Rb磷酸化增多(p＜0.01).但两组之间差异无统计学意义(p＞0.05). 结论：灵芝多糖可通过改变细胞周期调控因子cyclinD1/CDK4/p16进而调节Rb的磷酸化状态，发挥对抗H2O2诱导的HDF细胞衰老的作用。