论文部分内容阅读
目的:探讨补肾健脾活血方干预由腺病毒转染的过表达SFRP1和沉默SFRP1的成骨细胞,并观察细胞的增殖、ALP活性及胞RUNX2、BMP2、OPN、ERR α等骨形成蛋白表达,为中医药在辅助治疗骨质疏松症及分子生物学机制上提供新的思路和方法。方法:通过构建sFRP1过表达及沉默重组腺病毒载体,并转染大鼠类成骨细胞系UMR106细胞,初步分为空载腺病毒组、过表达SFRP1组、沉默SFRP1组。再根据备制的补肾健脾活血方含药血清和生理盐水空白血清根据组别分别进行不同干预,并观察6组细胞的增殖、ALP活性及细胞RUNX2、BMP2、OPN、ERR α等骨形成蛋白表达。结果:①各组细胞活性变化在空载腺病毒组中,相比较于空白血清干预,24h、48h、72h在补肾健脾活血方含药血清干预后UMR106细胞的细胞活性均显著高于空白血清干预的(P<0.05)。与空白血清+空载腺病毒组相比较,24h、48h、72h的空白血清+SFRP1沉默组的UMR106细胞活性均显著高于空白血清+空载腺病毒组(P<0.05),而空白血清+SFRP1过表达组的UMR106细胞活性则均分别显著低于空白血清+空载腺病毒组(P<0.05)。与空白血清+SFRP1沉默组相比较,24h、48h、72h的含药血清+SFRP1沉默组的UMR106细胞活性显著高于空白血清+SFRP1沉默组(P<0.05)。与空白血清+SFRP1过表达组相比较,24h、48h、72h的含药血清+SFRP1过表达组UMR106细胞显著高于空白血清+SFRP1过表达组(P<0.05)。②各组细胞ALP活性变化空载腺病毒组中,相比较于空白血清干预,在补肾健脾活血方含药血清干预后UMR106细胞ALP活性显著上调(P<0.05)。与空白血清+空载腺病毒组相比较,空白血清+SFRP1沉默组的UMR106细胞ALP活性显著上调(P<0.05),而空白血清+SFRP1过表达组的UMR106细胞ALP活性显著下调(P<0.05)。与空白血清+SFRP1沉默组对比,含药血清+SFRP1沉默组,UMR106细胞ALP活性显著上调(P<0.05)。在与空白血清干预的SFRP1过表达组相比较中,补肾健脾活血方含药血清干预的SFRP1过表达组UMR106细胞ALP活性显著显著上调(P<0.05)③各组细胞骨形成相关蛋白的变化在蛋白免疫印迹检测中,空载腺病毒组中,相比较于空白血清干预,在补肾健脾活血方含药血清干预后UMR106细胞RUNX2、BMP2、OPN、ERR α蛋白表达显著上调(P<0.05)。与空白血清+空载腺病毒组相比较,空白血清+SFRP1沉默组的UMR106细胞RUNX2、BMP2、OPN、ERR α蛋白表达显著上调(P<0.05),而空白血清+SFRP1过表达组的UMR106细胞RUNX8、BMP2、OPN、ERR α蛋白表达显著下调(P<0.05)。与空白血清+SFRP1沉默组对比,含药血清+SFRP1沉默组,UMR106细胞RUNX2、BMP2、OPN、ERR α蛋白表达显著上调(P<0.05)。与空白血清+SFRP1过表达组对比,含药血清+SFRP1过表达组UMR106细胞RUNX2、BMP2、OPN、ERR α蛋白表达显著上调(P<0.05)。结论:1、过表达sFRP1可以降低UMR106细胞增殖活性、降低ALP活性以及下调RUNX2、BMP-2、OPN、ERR α等骨形成蛋白表达;2、补肾健脾活血方以及沉默sFRP1均可升高UMR106细胞增殖活性、提高ALP活性以及上调RUNX2、BMP2、OPN、ERR α等骨形成蛋白表达,且两者共同干预时作用更为显著。3、补肾健脾活血方某种程度上可抑制sFRP1的过表达,补肾健脾活血方调节成骨细胞代谢促进增殖、提高成骨分化活性和促进骨形成的蛋白表达。其作用于成骨细胞机制上SFRP1并不是唯一的作用靶点,很有可能存在着其他作用靶点来协同促进以及调节成骨细胞的代谢。