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目的构建表达分泌型瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因的重组腺病毒载体,并导入U251脑胶质瘤细胞,检测重组腺病毒sTRAIL诱导的U251胶质瘤细胞凋亡及其与细胞周期的关系。方法采用PCR技术从人肝脏cDNA文库中扩增出编码114-281位氨基酸的TRAIL基因片段。将扩增的TRAIL插入含有分泌性信号肽IL-2的腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-IL-2中,命名为pAdTrack-CMV-IL-2-TRAIL。pAdTrack-CMV-IL-2-TRAIL经PmeI线性化后,电转化入转化了pAdEasy-1的BJ5183细胞。筛选重组腺病毒质粒pAd-sTRAIL。经HEK293细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒Ad-sTRAIL,氯化铯密度梯度离心纯化Ad-sTRAIL病毒,并测定病毒滴度。采用RT-PCR法和western blotting分别检测目的基因的表达。细胞培养并用重组腺病毒sTRAIL感染U251胶质瘤细胞,光镜及荧光显微镜下观察U251细胞的形态变化及转染成功率,免疫荧光技术检测sTRAIL感染U251胶质瘤细胞后在细胞内的表达,MTT法检测sTRAIL对U251胶质瘤细胞的杀伤作用特点,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,并判断二者的相关性。结果纯化后的Ad-sTRAIL病毒滴度为3.12×1015pfu/L。经RT-PCR扩增出104bp的基因片段。Wetern blot检测到目的基因在U251细胞的表达。感染了Ad-sTRAIL的U251细胞在TRAIL的表达和产生过程中增殖能力受到抑制并出现明显的凋亡,流式细胞术检测示G0/G1期、S期细胞比例与对照组相比明显降低,出现较高的亚二倍体峰。结论成功构建了重组分泌型sTRAIL腺病毒载体Ad-sTRAIL,可高效感染U251细胞并表达sTRAIL;Ad-sTRAIL可诱导U251胶质瘤细胞凋亡：在一定范围内,随病毒浓度增加或作用时间延长,瘤细胞存活率降低;sTRAIL作用于U251胶质瘤细胞后,G0/G1期、S期细胞比例下降,G2/M期细胞比例上升,提示sTRAIL诱导的U251细胞凋亡具有细胞周期特异性,可特异性杀伤G1期、S期细胞。本研究为进一步研究TRAIL的作用机制及发挥TRAIL在胶质瘤治疗中的应用开拓了新的思路。