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目的肿瘤转移抑制基因TMSG-1的肿瘤转移抑制和神经酰胺合成功能方面已经做过大量研究,但其转录功能研究甚少。本研究通过构建含有TMSG-1蛋白不同功能域的真核重组质粒并观察各重组质粒在亚细胞的定位,以确定基因内部的核定位信号,探索TMSG-1蛋白作为转录因子的新功能。方法以TMSG-1真核表达载体为模板,聚合酶链式反应(PCR)扩增TMSG-1基因全长和不同截断体片段,与带有Flag标签的真核表达载体pcDNA3连接,转化感受态细胞DH5a,经氨苄青霉素筛选阳性克隆,菌液提取质进行粒酶切初步鉴定,后由上海生物工程公司测序鉴定。将序列正确的各重组质粒转染Hela细胞,Western bloting鉴定蛋白表达。免疫荧光检测各个截断体亚细胞定位。通过TMSG-1基因结构分析,对预测的核定位序列进行缺失研究,构建QST5重组质粒并观察亚细胞定位改变；结果PCR成功扩增得到目的基因片段,并构建得至TMSG-1全长及不同截断片段T1(aal29-aa380)、T2(aa71-aa380、T3(aal-aal28)、T4(aa1-aa70)、T5(aa71-aal28)和核定位信号缺失体QST5(aa71-aa118)的真核表达质粒,经酶切初步鉴定及基因测序鉴定,各重组质粒基因序列全部正确,Western bloting检测结果表明各重组的真核表达载体均有预期长度的蛋白表达。免疫荧光结果表明,含有Homeodomain结构域的截断体T2、T3及T5能够入核,其中T2在核内弥漫分布,而T3及T5主要定位于细胞核的核仁部位,缺失预测核定位信号(NLS)序列的QST5仍定位于细胞核,但其荧光信号不集中在核仁。不含Homeodomain结构域的T1和T4定位于细胞浆。结论成功构建TMSG-1全长及不同截断片段的真核表达载体并成功表达,确定TMSG-1蛋白含有Homeodomain结构域的截断体能够入核,而缺失Homeodomain结构域中预测的核定位序列的截断体能定位于细胞核,却不再集中于核仁,初步确定其核定位信号很有可能为核仁定位信号,具有转录因子活性引导基因进入核仁,为研究TMSG-1蛋白转录功能奠定基础,并为肿瘤的基因治疗提供新的思路。