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新疆阿克苏灰枣(Zizyphus jujuba cv.Huizao)是阿克苏地区的主栽品种,也是新疆红枣产业发展的主导品种。阿克苏灰枣富含多种微量元素和多糖、黄酮、三萜类、多酚类等功能成分,具有免疫、抗氧化和抗衰老等多种保健功效。免疫作用是大枣的重要保健作用之一,深入研究灰枣免疫功能成分及特性,对阐明灰枣免疫作用机制,促进产品开发有理论实践应用意义。本文以新疆阿克苏灰枣为原料,研究了枣中多糖、多酚、黄酮和三萜类化合物4种生物活性成分提取方法、免疫活性鉴定、免疫交互作用及多糖组分的免疫特性。主要研究结果和结论如下:1.枣中生物活性成分提取方法:采用热水浸提法提取阿克苏灰枣多糖,提取条件为:料液比为1:30,提取温度为70°C,提取时间为6 h,提取得率为(7.955±0.049)%。采用超声波法提取阿克苏灰枣黄酮,提取条件为:料液比1:10,乙醇浓度60%,超声功率400 W,提取温度60°C,超声时间30 min,提取得率为(0.379±0.004)%;采用AB-8大孔吸附树脂富集,柱上静态吸附210 min,以75%乙醇洗脱,收集洗脱液。采用超声波法提取阿克苏灰枣三萜类化合物,提取条件为:料液比1:25,乙醇浓度60%,超声功率300 W,提取温度70°C,超声时间20 min,提取得率为(5.831±0.021)%。采用超声波法提取阿克苏灰枣多酚,提取条件为:料液比1:25,乙醇浓度80%,超声功率400 W,提取温度50°C,超声时间15 min,提取得率为(22.13±0.228)%。2.枣中生物活性成分免疫作用鉴定:小鼠脾细胞增殖试验和腹腔巨噬细胞增殖试验结果表明,多糖、多酚和三萜类化合物都具有促进小鼠淋巴细胞和腹腔巨噬细胞增殖的作用,是灰枣的免疫成分。多糖的促进作用显著大于多酚和三萜的作用,但又与总提取物的促进作用无差异,表明多糖在免疫细胞增殖作用中起主要作用。3.枣中生物活性成分免疫交互作用:小鼠体内实验结果表明,多糖、多酚和三萜类化合物均可显著提高小鼠的免疫器官指数、半数溶血素HC50和吞噬指数α以及抑制小鼠足跖肿胀度,具有增强小鼠细胞免疫、体液免疫以及非特异性免疫的作用;交互作用结果表明,多糖和多酚具有协同免疫作用,多糖和三萜类化合物具有拮抗免疫作用。4.灰枣多糖组分:Sevage法脱蛋白后的多糖经DEAE-52纤维素柱、Sephadex G-200柱纯化后,得到HP1和HP2,HP1和HP2在260 nm和280 nm处均无特征吸收峰,不含核酸和蛋白质;HPGPC测得HP1和HP2的重均分子量(Mw)为6.87×104 Da和1.11×105 Da;GC测得HP1的单糖组成摩尔比为鼠李糖:阿拉伯糖:甘露糖∶葡萄糖:半乳糖=1.00:2.43:3.01:7.28:7.11,HP2的单糖组成为鼠李糖:阿拉伯糖:甘露糖∶葡萄糖:半乳糖=1.00:3.28:1.89:0.48:2.28。5.灰枣多糖免疫特性:HP1和HP2均可以显著提高小鼠免疫器官指数和巨噬细胞吞噬指数,增强小鼠迟发型变态反应,促进溶血素生成,以增强机体的特异性和非特异性免疫功能,且HP2的免疫活性较HP1的高。