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油脂酵母属是重要的产油脂微生物,而目前尚未见到关于我国分离鉴定该属野生酵母菌株的报道。本文通过建立油脂酵母属酵母菌定向分离方法,对海南岛岛土壤中的油脂酵母属酵母菌进行分离纯化和鉴定,并对分离菌株进行产油脂能力的研究,以期丰富我国产油脂酵母菌种资源库以及得到利用混合糖(葡萄糖和木糖)的高产油脂酵母菌株,为混合糖的利用及木薯水解液发酵法生产微生物油脂提供依据和奠定基础。主要研究结果如下:(1)以N-free+C平板培养基作为分离平板培养基,通过采用直接分离和富集分离的方法,从海南岛47份土壤中分离到55株油脂酵母属酵母菌,经形态学特征及26SrDNAD1/D2、ITS和EF-1α区域序列分析初步鉴定为油脂酵母属(Lipomyces)9种及油脂酵母属无性属(Myxozyma)1种。其中,琪琪油脂酵母Lipomyces chichbuensis、Lipomyces tetrasporus 各 2 株,各占总数的 3.7%; Lipoyces doorenjongii 12 株,占总数的2 1.8%; Myxozyma geophila 、 Lipomyces spencermartinsiae 、 Lipomyces yamadae各1株,占总数的1.9%;桔林油脂酵母Lipomyyes kononenkoae 23株,占总数的41.8%;Lipomycesorientalis3 株,占总数的 5.5%;斯达油脂酵母 ipomyces starkeyi 共 6 株,占总数的10.9%;Lipomycesyarrowii 4株,占总数的7.4%。桔林油脂酵母Lipomyces kononenkoae为海南岛土壤中优势种,广泛分布于海南岛9个地区。(2)通过重量法、磷酸香草醛显色法和氧化酶法三种不同测定微生物油脂含量方法的比较分析:重量法和磷酸香草醛显色法测定的都为酵母菌胞内总脂。重量法准确、操作过程繁琐、耗时长;磷酸香草醛显色法的平均回收率为93%,准确度和精确度较高,耗时少,所需样品量少,测定时需与相应菌种的菌体油脂标准曲线匹配使用;氧化酶法测定的为酵母菌胞内甘油三酯(中性脂肪)含量,氧化酶法平均回收率达到98.03%,准确度和精确度好,该方法操作简便,耗时少需对菌体细胞进行破壁和与甘油三酯标准曲线匹配使用。在实际应用中,可根据测定需要和实验条件,在测定菌体总脂时可选择重量法或磷酸香草醛显色法,在测定菌体胞内甘油三酯(中性脂肪)含量时应选择氧化酶法。(3)对海南岛土壤中分离的55株野生酵母菌株中进行葡萄糖和木糖及两者的混合糖为碳源进行产油脂能力的筛选,得到3株能够利用混合糖(葡萄糖、木糖)发酵高产油脂的酵母菌株YP-18、YP-23、YP-32,菌株在三种比例混合糖(葡萄糖:木糖为2:1,1:1,1:2)条件下产油脂能力均较好。其中菌株YP-32在葡萄糖:木糖为2:1发酵120h,产油脂能力达到最大值,生物量、油脂产量和油脂含量分别为22.21 g/L和13.42 g/L和60.42%。3株高产油脂菌株以5种比例的混合糖为碳源发酵产油脂脂肪酸组成相似,均以C16和C18系脂肪酸为主,其中含量最高的为油酸,其次为棕榈酸和硬脂酸,且这三种脂肪酸含量占90%以上。(4)菌株YP-18、YP-23、YP-32可高效利用木薯水解液发酵产油脂,其中菌株YP-32产油脂能力最高。经发酵过程分析表明:菌株YP-32最佳发酵时间为120h,生物量、油脂产量、油脂含量和油脂系数达到最大值,分别为16.68 g/L、7.15 g/L、42.88%、10.58g/100g。