亮菌液体发酵工艺及亮菌多糖抗氧化抑菌活性研究

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亮菌,该菌属担子菌亚门,假蜜环菌属。亮菌多糖是亮菌在生长过程中代谢产生的一种重要的活性物质,其活性主要表现在抑菌,抗氧化,抗肿瘤,提高机体免疫力等方面。随着液体发酵技术的进步,越来越多的真菌采用液体发酵的方式进行培养。本论文首先通过单因素试验,优化了亮菌液体发酵条件,研究了亮菌多糖抑菌活性和抗氧化特性。主要的研究结果如下:本课题首先优化了亮菌液体发酵所需的最佳碳源为5%玉米粉,最佳的氮源是酵母膏。然后针对亮菌液体发酵条件的优化,通过单因素试验和正交设计优化试验,初步筛选出最佳的发酵条件为:培养温度24℃,转速130 r/m,接种量18%,时间10天。液体发酵培养的起始条件尤为重要,通过对起始pH、起始糖浓度和起始钙离子浓度进行单因素优化,最终得到了针对亮菌液体发酵所需的最佳条件,最佳的起始pH为6,起始钙离子浓度为0.5%,起始糖浓度为3%。在研究亮菌多糖的抑菌活性中,使用CFU法对五种菌株进行筛选,结果显示亮菌多糖对于大肠杆菌抑制效果明显好于其它四种菌株。在对亮菌多糖作用大肠杆菌的最小抑制浓度的试验测试中,得出亮菌多糖作用大肠杆菌的MIC值为19.6±0.31μg/mL。在抑菌机制分析中,在扫描电镜结果可以看出,多糖作用的大肠杆菌细胞出现破损和坏死,细胞质流出聚集成团,且多糖浓度增高,菌体破损越明显。为进一步的探究亮菌多糖抑制大肠杆菌作用机制,本课题继续通过超薄切片试验观察多糖作用后的大肠杆菌内部结构的变化。结果发现多糖处理后的大肠杆菌内部核酸和细胞质消失,细胞壁出现褶皱,破损情况。通过亮菌多糖的抑菌活性试验后,可发现多糖对大肠杆菌具有明显的抑制作用,可发现细胞破损,胞内物质外流,细胞死亡。在研究亮菌多糖的抗氧化活性中,首先在总还原力的测定中,可发现亮菌多糖具有抗氧化活性。进一步测定自由基清除活性大小,V_C和BHT的活性均大于亮菌多糖,但是通过结果也可以得知亮菌多糖的清除自由基的活性也较好。因此亮菌多糖可作为一种有效的天然的抗氧化剂使用,具有良好的开发前景。
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