负载丹参酮ⅡA磺酸钠的PEG-CS血管支架涂层的构建及性能研究

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血管对于人体十分重要,健康的血管系统是维持我们人体器官和组织正常功能的关键。慢性疾病和先天性疾病等各种原因造成的血管功能损伤和血管疾病在临床上十分常见。药物治疗和介入治疗容易导致内膜脱落和血管壁损伤。自体血管移植仍然是外科手术治疗的金标准,但是自体血管的来源有限且容易造成二次创伤。人工血管移植成为一种新兴的治疗方式。然而,小口径人工血管支架的植入常引起急性血栓、内膜增生以及远期的血管壁钙化等问题,使血管的长期畅通受到阻碍。因此,理想的人工血管支架需要合理的结构设计和适当的表面修饰,在血管重建中促进原位内皮化和抗凝血。本课题结合天然材料和合成材料,选用丹参酮IIA磺酸钠(Sodium tanshinone IIA sulfonate,STS)和接枝聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)的壳聚糖(Chitosan,CS)共聚物(PEG-CS)对静电纺丝制备的聚乳酸-己内酯(PLCL)纳米纤维表面进行功能性涂层,并评估该涂层抗血栓性能和促进内皮层快速再生的能力,具体研究内容和结果如下:(1)合成三个PEG接枝度(5%、10%、15%)的PEG-CS共聚物,以多巴胺为连接剂,定制的模具内将溶液制成5%PEG-CS、10%PEG-CS、15%PEG-CS涂层,研究不同共聚物作为涂层的亲疏水性、力学性能、细胞相容性和抗血小板粘附能力。傅里叶变换红外光谱仪和核磁共振氢谱的分析结果显示共聚物的化学结构符合预期,实际的接枝量分别为4.4%、7.9%、12%。水接触角的测试结果表明,涂层的介入明显改善了纳米纤维膜的亲水性能,且随着涂层溶液中PEG接枝量的增加,涂层的水接触角越小,即亲水性越好。力学测试结果显示,作为涂层基底的PLCL具有较好的拉伸性能。体外的血小板粘附实验结果可以看出,涂层上粘附的血小板与对照组PLCL相比明显减少,且随涂层中PEG接枝度的增加呈现递减趋势。此外,细胞相容性实验表明,15%PEG-CS涂层更有利于内皮细胞的粘附和增殖。(2)为了提高涂层的快速内皮化和抗凝功能,通过静电作用在15%PEG-CS溶液中负载不同质量分数(0.01%;0.05%;0.1%)的丹参酮IIA磺酸钠,对不同STS涂层(STS-0.01;STS-0.05;STS-0.1)的细胞相容性和血液相容性进行评估。后续的血液相容性结果显示,随着丹参酮IIA磺酸钠浓度的增加,涂层的溶血率下降,抗血小板的粘附激活能力提高,血浆凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(APTT)延长。并且细胞相容性实验结果表明,丹参酮IIA磺酸钠的加入促进了内皮细胞的生长,STS-0.01最为明显。因此,综合体外的表征结果可以初步判断STS-0.01在促进内皮化和抑制血栓形成方面具有一定的潜能。(3)为了进一步评价涂层的体内生物相容性和结构稳定性,将PLCL纳米纤维膜和STS-0.01涂层植入到大鼠皮下,在第1、2、4周进行取样,通过H&E染色法、Masson’s trichrome染色法对切片进行组织学分析。周围组织的H&E和Masson’s trichrome染色结果显示,STS-0.01涂层出现较轻的炎症反应,包埋4周后,PLCL纳米纤维膜内部具有大量宿主细胞迁移及较多的胶原沉积,而STS-0.01涂层面几乎没有细胞向涂层内部迁移生长,表明该涂层具有较好的稳定性和较慢的降解能力。综上,本课题制备的STS-0.01涂层具有合适的结构稳定性、血液相容性和生物相容性,运用于血管组织工程支架涂层具有很好的发展潜力。
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