近视模型大鼠的行为学变化及视皮层和杏仁核的神经机制探究

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目的:本实验旨在通过建立近视大鼠模型,初步探讨近视是否导致焦虑样行为学变化,进一步分析该行为学变化是否与视皮层和杏仁核的神经元的某种活动有关,从而进一步为临床近视的防控以及缓解近视人群的焦虑等心理活动的变化提供一定的理论基础。方法:健康乳Spragus-Dawley(SD)大鼠,随机分为对照组及近视模型组,自由饮水及进食。采用波长740nm红色低频闪烁光照12h/d,闪烁频率为亮2s,暗2s,该环境饲养9周,进行近视大鼠模型制备。在造模9周后,通过测量两组大鼠眼轴长度,近视模型组大鼠眼轴长度显著增长时,可鉴定近视大鼠模型成功制备;通过称重、高架十字迷宫(elevated plus maze,EPM)实验、糖水偏好实验(sucrose preference test,SPT)和旷场(open-field,OF)实验,观察对照组及近视模型组大鼠的行为学变化,当组间比较具有显著性差异时,提示近视模型大鼠存在焦虑样行为学变化;再通过在体细胞外记录技术记录初级视皮层(primary visual cortex,Vl)和中央杏仁核(central nucleus of the amygdala,Ce A)神经元自发放电情况,分析近视是否与视中枢V1神经活动有关,及近视模型大鼠行为变化是否与中枢Ce A神经活动有关;给V1神经元施加电刺激的同时,同步观察Ce A神经元放电活动,分析刺激V1前后Ce A神经元放电活动变化情况,确定V1和Ce A之间存在调节通路的可能性;酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测大鼠V1区和杏仁核中谷氨酸(glutamate,Glu)和谷氨酸受体(glutamate receptor,Glu R)浓度,分析近视模型大鼠行为学变化的视皮层和杏仁核中枢神经递质调控机制。结果:1.对照组与近视模型组大鼠眼轴长度的比较在造模9周后,对照组与近视模型组大鼠的眼轴长度存在显著性差异(P<0.01)。红色低频闪光造模的大鼠眼轴显著变长,而对照组大鼠眼轴呈正常生长。2.对照组与近视模型组大鼠体重和行为学的变化造模9周后,与对照组相比,近视模型组大鼠的各项指标均有明显变化,如体重明显减轻(P<0.01);在EPM实验中,近视模型组大鼠开放臂停留时间明显降低(P<0.01),提示模型组大鼠存在焦虑样心理变化;在SPT实验中,近视模型组大鼠糖水偏好显著降低(P<0.05),提示近视模型组大鼠快感缺失;在OF实验中,近视模型组大鼠运动总距离明显缩短(P<0.01),提示近视模型组大鼠活动量低,焦虑样心理变化明显。3.各组大鼠视皮层V1区神经元放电活动及Glu和Glu R含量的比较造模9周后,与对照组相比,近视模型组V1的神经元放电频率明显降低(P<0.05),近视模型组大鼠左侧视皮层V1区Glu和Glu R表达显著降低(P<0.05)。与对照组相比,电刺激组V1区Glu表达显著增加(P<0.01)。4.各组大鼠杏仁核神经元放电活动和Glu R表达的变化造模9周后,与对照组相比,近视模型组Ce A的神经元放电频率显著增加(P<0.01);在ELISA实验中,近视模型组杏仁核Glu R表达显著增多(P<0.05)。5.视皮层V1区与杏仁核的功能学联系对正常大鼠视皮层V1区进行电刺激(100-400μA),与刺激前相比,中央杏仁核神经元放电频率降低,且刺激强度在300和400时有显著差异(P<0.01);对大鼠视皮层V1区进行电刺激(100-400μA),在ELISA实验中,杏仁核Glu含量与对照组大鼠相比显著增加(P<0.05)。结论:低频闪烁红光成功诱导大鼠近视形成;近视模型大鼠存在焦虑样心理活动变化;这种行为学变化可能与视皮层和杏仁核神经元活动有关。
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