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外阴阴道假丝酵母菌病(Vulvovaginal Candidiasis, VVC)是一种妇科常见的阴道粘膜的真菌感染性疾病,该病发病率高且治疗后极易复发,对育龄妇女的身心健康造成了很大的影响。白假丝酵母菌是最常见的致病菌种,约占70%-90%。菌丝形态的白假丝酵母菌对宿主有很强的粘附和侵入能力。前列腺素E2(Prostaglandin E2, PGE2)在白假丝酵母菌形态转化和增强其致病力过程中起重要作用。与酵母态相比,菌丝态的白假丝酵母菌对宿主具有更强的粘附能力。而白假丝酵母菌在致病过程中,不仅可刺激宿主产生PGE2,其本身也可产生PGE2,两者相互作用是造成白假丝酵母菌持续感染人粘膜的发病机制之一。环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2, COX-2)是调节花生四烯酸转化为前列腺素(Prostaglandins, PGS)的重要限速酶,可被性激素、生长因子及炎性因子等诱导表达,PGE2是其主要的酶促产物之一。近年来的动物实验和临床证据均表明,高雌激素水平使个体对外阴阴道假丝酵母菌病的易感性增加,雌激素促进白假丝酵母菌菌丝形成及增殖,使其毒力增强。研究表明,雌激素能显著性上调COX-2在人子宫微血管内皮细胞和狗前列腺组织中的表达。对COX-2基因序列分析结果表明,其启动子中含有核转录因子(Nuclear Factor-κB, NF-κB)结合位点。NF-κB作为一种具有多向调节功能的核转录因子,其信号通路的激活可以上调COX-2的表达从而促进PG的生成。白介素-1β(Interlenkin-1β,IL-1β)是在免疫和炎症反应中起核心作用的细胞因子,其能够促进NF-κB的表达和活化。基于此,在阴道白假丝酵母菌感染过程中,雌激素是否能够上调阴道组织中COX-2的表达来促进感染形成,NF-κB、IL-1β在雌激素调控COX-2表达的过程中起到了何种作用,以及它们与COX-2表达的协同关系,这些问题都值得探讨。本研究采用雌小鼠给予外源性雌激素形成假发情来建立外阴阴道假丝酵母菌病小鼠模型,应用免疫组化和原位杂交方法在细胞水平和分子水平研究COX-2及其mRNA在小鼠阴道组织内的表达情况,以及应用免疫组化,ELISA法观察阴道组织中NF-κB、IL-1β表达的动态变化,以及它们与COX-2表达的协同关系,旨在研究雌激素诱发外阴阴道假丝酵母菌病的作用,藉此探讨其致病的可能机制,为更有效的防治外阴阴道假丝酵母菌病提供新的思路和实验依据。分二部分简述如下:第一部分雌激素诱导外阴阴道假丝酵母菌病小鼠模型中环氧化酶-2的表达目的:探讨雌激素对外阴阴道假丝酵母菌病小鼠模型阴道组织中COX-2表达的影响及其在发病机制中的作用。方法:采用雌性昆明小鼠,预先皮下注射雌激素使其处于假发情状态,然后接种5×106假丝酵母菌孢子构建VVC模型(EI组),并设置雌激素处理未感染组(E组)、未用雌激素处理感染组(I组)、和空白对照组(C组)。动态观察小鼠阴道灌洗液的真菌载荷量及菌丝生成情况,然后在接种后的不同时间点摘取小鼠阴道组织,对阴道组织进行组织病理学检查(HE染色和PAS染色),免疫组化方法检测阴道组织中COX-2蛋白的表达情况。结果:与未用雌激素处理的I组小鼠比较,雌激素处理并接种白假丝酵母菌的EI组小鼠阴道灌洗液的真菌载量分析显示自第2天开始可分离出高水平的cfu计数并持续到接种后第14天。EI组阴道组织病理结果发现自第2天至实验结束均可见到阴道粘膜浅层有菌丝生长,阴道粘膜及粘膜下均有炎性细胞浸润。除C组外,各组小鼠阴道组织内第2天出现COX-2的阳性表达,持续升高至第7天达到高峰;E组在第4、7天COX-2免疫组化检测OD值分别为0.157±0.017和0.161±0.014,与C组(0.101±0.014和0.106±0.014)比较均具有统计学差异(P均<0.05)。EI和I组第7天的OD值分别达到0.275±0.059和0.234±0.063,与对照组相比明显上调(P均<0.01),且EI组显著高于I组(P<0.05)。结论:在外阴阴道假丝酵母菌病小鼠模型中,雌激素能通过诱导阴道组织中COX-2的表达在其发病机制中起重要作用。第二部分雌激素依赖的外阴阴道假丝酵母菌病小鼠模型NF-κB、IL-1β和COX-2 mRNA的表达及意义目的:观察NF-κB、IL-1β和COX-2 mRNA在雌激素依赖的外阴阴道假丝酵母菌病小鼠模型中的动态变化,探讨雌激素诱发VVC的可能机制。方法:预先给雌性小鼠皮下注射苯甲酸雌二醇以造成并维持其假发情,再给予小鼠阴道内注入约5×106假丝酵母菌稳态芽生孢子,来构建VVC模型(此为EI组),并设置雌激素处理未感染组(E组)、未用雌激素处理感染组(I组)、和空白对照组(C组)。动态观察小鼠阴道灌洗液的真菌载荷量,然后在接种后的不同时间点摘取小鼠阴道组织,应用原位杂交法检测阴道组织中COX-2 mRNA表达水平;免疫组化检测NF-κB的表达;ELISA法检测组织匀浆中IL-1β的水平。结果:COX-2 mRNA在E组阴道组织的表达水平持续性明显高于C组(P<0.01),且EI组表达水平高于其它三组;接种后第4、7、14天EI组及I组小鼠的IL-1β水平高于C组(P<0.01),第7天达高峰,EI组小鼠在接种后第4、7天IL-1β表达水平明显单纯感染的I组(P<0.01);E组NF-κB的阳性表达率从第4天开始就明显高于C组(P<0.01),而EI组显著高于I组(P<0.01)。结论:在雌激素依赖的VVC小鼠模型中,雌激素激活阴道组织中NF-κB信号通路上调COX-2的表达使感染形成,而感染形成后IL-1β和NF-κB相互作用使COX-2强表达则与感染持续有关。