性别分化是生物发育的重要科学问题,鱼类性别发育机制多样,是研究脊椎动物性别问题的良好材料。社会性因素调控鱼类性反转的机制,是性别发育中既复杂又有趣的问题。波纹唇鱼是一种由雌转雄的性逆转鱼类,芳香化酶通过对性激素调控直接作用于性腺反转。对于社会性的性反转鱼类而言,找到Cyp19a1的上游调控因子,能够进一步揭示性别调控通路的机制。类固醇生成因子1(SF-1/Ad4BP)是核受体超家族中的一员,通过调控芳香化酶表达,影响性别发育。叉头转录因子(FOXL2)也参与卵巢发育及其功能的维持。因而本文采用双荧光素酶报告等技术,研究FOXL2与SF-1对波纹唇鱼芳香化酶启动子的调控活性,并鉴定其关键元件。1.本文克隆得到FOXL2与SF-1编码区的开放阅读框,分别为1467bp和921bp,且采用双酶切酶连的方式分别构建了核表达载体。预测出Cyp19a1a启动子上存在SF-1的3个转录位点,Cyp19a1b启动子上含有SF-1的5个和3个FOXL2转录结合位点。2.通过构建性腺型Cyp19a1a和脑型Cyp19a1b启动子的荧光素酶报告系统,将SF-1、FOXL2的真核表达载体共转染进入细胞系HEK293T和COS-7中,结果表明,SF-1和FOXL2分别都能增强波纹唇鱼芳香化酶启动子的活性,两种转录因子共同转染能显著上调Cyp19a1启动子的活性。3.通过采用构建启动子渐进缺失体、融合PCR、定点突变技术等技术,构建3个Cyp19a1a启动子渐进缺失体和位点突变体。结果显示,-120bp至-112bp的突变使得SF-1显著降低Cyp19a1a启动子的转录活性。构建5个Cyp19a1b启动子渐进缺失载体,选择对启动子转录活性影响较大的区域内的预测位点进行突变,结果发现突变SF-1的潜在结合位点不能显著影响Cyp19a1b启动子的活性。构建Cyp19a1b启动子渐进缺失载体3个及3个位点突变体,结果显示-890bp至-872bp突变显著降低脑型芳香化酶Cyp19a1b的转录活性。本研究发现,SF-1和FOXL2都能对波纹唇鱼波纹唇鱼性腺型芳香化酶Cyp19a1a启动子和脑型芳香化酶Cyp19a1b启动子进行调控,Cyp19a1a启动子上存在一个SF-1的关键结合元件,Cyp19a1b启动子存在一个FOXL2的关键结合元件。SF-1和FOXL2结合能增强波纹唇鱼芳香化酶启动子的活性。本研究为进一步揭示波纹唇鱼的芳香化酶基因转录调控通路提供了理论支持。