清心开窍方三种提取部位对AD大鼠学习记忆障碍的影响

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目的:  探讨清心开窍方三种提取部位对AD大鼠学习记忆障碍的影响。  方法:  选用清洁级青年雄性SD大鼠(250±20g)112只,随机分为7组:正常组,假手术组,模型组,安理申组,皂苷组,挥发油组,多糖组,每组16只。除正常组外,模型组及各治疗组均采用双侧海马注射聚集态的A阻-40建立AD模型大鼠,假手术组双侧海马注射等体积的生理盐水。所有大鼠于造模后第二天开始灌胃,安理申组,皂苷组,挥发油组,多糖组分别服用安理申溶液(1.67mg/kg/d),皂苷提取物(9ml/kg/d)、挥发油提取物(3.33ml/kg/d)、及多糖提取物(8.33ml/kg/d),正常组,假手术组,模型组分别灌服等体积的生理盐水,连续14天。采用Morris水迷宫测试大鼠的空间学习记忆能力,包括定位航行实验(逃避潜伏期)和空间搜索实验(穿台次数)。治疗2周结束后,各组AD大鼠经心脏依次灌注生理盐水及4%多聚甲醛固定后,用免疫组化法观察Aβ,IL-1β及GFAP在大鼠海马CA1区组织神经元中的表达,六胺银染色法检测海马CA1区内Aβ的沉积;直接取双侧海马冻存,采用Western Blot检测海马区Aβ,IL-1β及GFAP的表达,实时定量PCR检测海马区Aβ mRNA,IL-1β mRNA及GFAP mRNA的表达。  结果:  1.Morris水迷宫结果  造模前各组大鼠同一时间点的逃避潜伏期、穿台次数均无统计学意义,且逃避潜伏期随时间推移逐渐缩短。造模后,与模型组比较,除挥发油组、多糖组外,各治疗组的逃避潜伏期均缩短,穿台次数显著增多(P<0.05,P<0.01;与安理申组比较,清心开窍方三种提取部位组大鼠逃避潜伏期均延长,穿台次数减少(P<0.05,P<0.01);清心开窍方三种提取部位组之间比较:皂苷组的逃避潜伏期比挥发油组、多糖组缩短,穿台次数较两组增加(P<0.05,P<0.01),且多糖组的潜伏期最长;而挥发油组与多糖组的穿台次数比较无显著差异(P>0.05)。  2.六胺银染色的结果  在模型组大鼠海马CA1区可见大量的六胺银染色后的黑色老年斑块的沉积,与对照组(正常组、假手术组)比较差异显著(P<0.01);与模型组比较,安理申组,皂苷组大鼠海马CA1区黑色老年斑块阳性数量减少(P<0.05,P<0.01),而挥发油组,多糖组大鼠海马CA1区黑色老年斑块阳性数量与模型组大鼠无统计学意义(P>0.05);与安理申组比较,清心开窍方三种提取部位组大鼠海马CA1区老年斑块数量显著增多(P<0.05,P<0.01);而清心开窍方三种提取部位组之间比较:挥发油组,多糖组大鼠海马CA1区老年斑数量较皂苷组增多(P<0.05);而挥发油组与多糖组比较差异无统计学意义(P>0.05).  3.免疫组化的检测结果  与模型组比较,各治疗组海马区Aβ,IL-1β与GFAP的表达均有不同程度的减少,有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与安理申组比较,清心开窍方三种有效提取部位组海马区Aβ,IL-1β与GFAP的表达有不同程度的增加(P<0.05,P<0.01);清心开窍方三种有效提取部位组相互比较结果显示:Aβ的表达在三组之间没有差异(P>0.05),皂苷组IL-1β与GFAP的表达较清心开窍方挥发油组,多糖组减少(P<0.05,P<0.01),挥发油组IL-1β与GFAP的表达比清心开窍方多糖组较少(P<0.05,P<0.01)。  4.海马区Aβ mRNA与蛋白水平表达的结果  与模型组比较,各治疗组海马区Aβ mRNA与蛋白水平表达均显著较少(P<0.05,P<0.01;与安理申组比较,清心开窍方三种有效提取部位组Aβ mRNA与蛋白水平表达均显著增加(P<0.01);皂苷组Aβ mRNA与蛋白水平表达较挥发油组、多糖组显著减少(P<0.01),而挥发油组Aβ mRNA与蛋白水平表达较多糖组减少(P<0.05,P<0.01)。  5.海马区IL-1βmRNA与蛋白水平表达的结果  与模型组比较,各治疗组海马区IL-1β mRNA与蛋白水平表达均显著较少(P<0.05,P<0.01);与安理申组比较,清心开窍方三种有效提取部位组IL-1βmRNA与蛋白水平表达均显著较少(P<0.01);清心开窍方三种有效提取部位组比较:皂苷组IL-1β mRNA与蛋白水平表达较挥发油组、多糖组明显减少(P<0.05,P<0.01),挥发油组IL-1βmRNA与蛋白水平表达较多糖组显著降低(P<0.01)。  6.海马区GFAPmRNA与蛋白水平表达的结果  与模型组比较,各治疗组海马区GFAP mRNA与蛋白水平表达均显著较少(P<0.05,P<0.01);与安理申组比较,清心开窍方三种有效提取部位组GFAPmRNA与蛋白水平表达均显著增多(P<0.05,P<0.01);清心开窍方三种有效提取部位组比较:皂苷组GFAP mRNA与蛋白水平表达较清心开窍方挥发油组、清心开窍方多糖组显著降低(P<0.05,P<0.01),而挥发油组GFAP mRNA与蛋白水平表达较清心开窍方多糖组明显减少(P<0.05,P<0.01)。  结论:  1.清心开窍方三种有效提取部位能不同程度的改善AD大鼠的学习记忆能力,皂苷提取物改善作用明显,挥发油提取物改善作用次之,多糖提取物的作用最差,但安理申的改善作用较三者显著。  2.清心开窍方三种有效提取部位能够降低AD大鼠海马区Aβ、IL-1β与GFAP的表达,提示清心开窍方三种有效提取部位可能通过抑制AD大鼠海马区的炎症反应,降低Aβ、IL-1β与GFAP的表达,从而改善AD大鼠的学习记忆能力。
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