拟南芥F-box家族基因FOA2的功能初步研究

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F-box蛋白家族广泛存在于真核生物中,该蛋白家族的共同特征是含有F-box结构域。F-box蛋白作为泛素-蛋白酶体途径中泛素连接酶的成分,通过选择性地识别和降解细胞内多种具有生物活性的蛋白质而调控许多植物生理现象,包括开花、激素信号转导、非生物胁迫反应等。采用启动子顺式作用元件分析软件对编码F-box蛋白的FOA2(F-box overexpressed/oppressed ABA signaling2)基因启动子进行预测得知该基因含有大量的光调控元件。本论文对FOA2基因表达的光调控模式及其功能进行了初步分析,获得了以下研究结果:采用实时定量PCR分析了FOA2基因对光的响应,发现该基因的mRNA及蛋白表达受蓝光、红光及远红光诱导。同时本文研究发现FOA2基因的mRNA表达具有一定的生物节律。分析FOA2基因在不同组织器官中的表达模式,发现该基因在拟南芥根、茎、叶、花、果实中均有表达,其中花和果实中的表达量最高。在对FOA2基因在果实不同发育时期的表达情况进行分析时,发现随着果实发育成熟时间的延长,其表达量增加。进一步检测FOA2基因在种子吸涨过程中表达情况,发现随种子吸涨时间延长该基因的表达量降低。比较不同光照条件下种子萌发率,发现黑暗、蓝光、红光下FOA2过量表达转基因种子萌发比野生型延迟,远红光下FOA2过量表达转基因种子的萌发率比野生型低。分析比较白光下不同浓度GA处理下种子的萌发率,发现GA可以恢复FOA2过量表达转基因种子萌发比野生型延迟的表型。用不同浓度paco、ABA处理分析比较种子的萌发率,发现与野生型相比过量表达转基因种子的萌发对paco、ABA更敏感,功能缺失突变体对paco、ABA的敏感性降低。实时荧光定量PCR方法检测GA和ABA合成及信号途径关键基因在野生型与突变体中的表达,发现在FOA2过量表达株系中促进萌发的GA3ox2基因的表达量降低,抑制萌发的GA2ox2、ATNCED9和RGL2基因的表达量均升高,FOA2缺失突变体株系中促进萌发的GA3ox2基因的表达量升高,抑制萌发的GA2ox2、ATNCED9和RGL2基因的表达量均降低,说明FOA2通过GA和ABA激素途径来正向调控种子休眠负向调控种子萌发。酵母双杂交结果显示,FOA2与ASK基因家族中的ASK1、ASK2、ASK11相互作用。因此,推测FOA2可能通过形成SCF复合体调节种子的休眠和萌发。
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