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产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxin-producing E. coli,STEC),又称产Vero毒性大肠杆菌(Vero toxin-producing E. coli,VTEC),是一群重要的肠道致病菌。目前至少有100多种血清型的大肠杆菌具有产志贺毒素的能力,其中血清型为0157：H7的菌株具较高致病力。通常将人类或者家畜感染病例中分离的具有p0157质粒、产生AE损伤(attaching and effacing lesion)的STEC菌株统称为肠出血性大肠杆菌(entero-hemorrhagic E. coli,EHEC)。肠出血性大肠杆菌(EHEC)感染性腹泻是目前世界范围内重要的公共卫生间题之一。其中0157：H7是典型菌株,对人和家畜具有很强的致病力。因此,如何快速有效地对该菌进行检测、监测,显得尤为重要。本研究通过EHEC0157甲醛灭活全菌免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,利用EHEC O157、O26全菌及其通过改进的水饱和酚法提纯LPS作为筛选抗原,分别经间接酶联免疫吸附试验(indirect enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)和直接凝集试验(direct agglutination test)筛选,共筛选出6株杂交瘤细胞,分别命名为3B5,3F10,4C8,5D11,1B12,1G9.间接ELISA结果显示：6株杂交瘤均只与EHEC0157全菌反应,而不与EHEC026全菌反应；其中3B5,3F10,4C8,5D11能与EHEC0157的LPS发生反应,而不与EHEC026的LPS发生反应。直接凝集试验结果显示：6株单抗与121℃高温处理的EHEC0157全菌反应,但都不与EHEC O26发生反应。选取3F10,5D11,1G9制备腹水并分别经间接ELISA、直接凝集试验、Western-blot进行鉴定。间接ELISA测得3F10,5D11,1G9对0157全菌反应效价均为3.2×105；3F10、5D11对0157LPS的反应效价分别为6.4×105和1.6×105；直接凝集试验测得：3F10、1G9对经121℃高温处理的EHEC0157全菌反应的效价分别为1：50和1:1000; Western-blot结果显示：3F10、5D11针对EHEC0157的LPS有特异性。另外,3F10、5D11、1G9三株单抗均不与沙门氏菌,巴氏杆菌,非0157菌株等发生交叉反应,表明上述单抗具有良好的特异性。三株单抗经亚类鉴定均为IgM。将单抗3F10通过优球蛋白沉淀法进行初步提纯,提纯后的蛋白浓度为：8.2mg/mL。将3F10包被聚苯乙烯磁珠,通过BCA蛋白定量试剂盒结合酶标仪检测偶联反应前后的抗体含量,计算出包被后的磁珠表面抗体量平均为62.6μg/mg。通过CFU计数该磁珠集菌前后水样中EHEC0157菌数,计算出该磁珠的吸附率为54.7%。该磁珠富集目的菌效果良好,并可去除样品中PCR反应抑制成分。模拟粪便样品经免疫磁珠集菌后直接制备模板用于多重PCR检测,其敏感性可达105CFU/g,而未经磁珠富集的模拟粪便样品直接制备模板用于多重PCR检测,敏感性只达106CFU/g。建立的单克隆抗体磁珠富集方法操作简便、节约时间,较适用于大规模样品的快速检测。