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目的:探讨蝙蝠葛活性成分对人肺癌A549细胞株诱导凋亡和抗增殖作用及其机制,为开发抗肿瘤新中药提供实验依据。方法:应用MTT法测定蝙蝠葛活性成分对人肺癌A549细胞株的生长抑制作用;通过倒置显微镜、光学显微镜、吖碇橙(AO)/溴化乙啶(EB)染色荧光显微镜观察肿瘤细胞凋亡的形态学变化;采用流式细胞仪检测A549细胞的周期分布相和细胞凋亡率;应用免疫细胞化学技术检测药物处理前后增殖细胞核抗原Ki-67及凋亡相关蛋白酶Caspase3、8、9及凋亡相关基因Bcl-2蛋白的表达。结果:(1)MTT法检测结果,蝙蝠葛活性成分对人肺癌A549细胞株有明显的抑制生长的作用,且呈现出浓度的依赖性:(2)倒置显微镜观察结果,实验组肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质凝集,细胞间连接疏松,贴壁能力减弱;(3)HE染色观察结果,实验组肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质浓缩或染色质块形成,有的细胞膜起泡形成凋亡小体;(4)AO/EB荧光染色观察结果,实验组肿瘤细胞核染色质呈橘红色,胞质内的橘红色或橘黄色荧光消失,细胞周围可见亮绿色的凋亡小体;(5)流式细胞仪检测结果显示:蝙蝠葛活性成分可以诱导A549细胞发生凋亡,加药组出现亚二倍体峰,并且G0/G1期细胞比例显著增加(P<0.01),而S期和G2/M期细胞比例则明显下降,将细胞阻滞在G0/G1期;(6)免疫细胞化学ki-67抗原检测结果,蝙蝠葛活性成分作用后ki-67阳性表达率随药物浓度的提高和作用时间的延长而降低,表现出浓度的依赖性关系;凋亡相关基因表达检测结果,实验组Bcl-2基因蛋白阳性表达率明显降低,加药组Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3表达增加,与对照组相比较均有显著差异(P<0.01)。结论:1.蝙蝠葛活性成分在体外对人肺癌A549细胞株有显著的抑制增殖和诱导凋亡作用。2.蝙蝠葛活性成分抑制增殖作用机制可能与下调ki-67蛋白表达,细胞周期发生G0/G1期阻滞有关。3.蝙蝠葛活性成分诱导凋亡作用机制可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达,经由细胞凋亡的死亡受体和线粒体通路完成凋亡的启动和执行。4.蝙蝠葛活性成分具有显著的体外抗肿瘤作用,有望开发成一种新的抗肿瘤药物。