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Prion疾病又叫可传播性海绵状脑病,是一组神经退行性疾病,包括人的克雅病(CJD)、吉斯综合征(GSS)、家族性致死性失眠症(FFI)和克鲁病(Kuru),动物的羊痒病(Scrapie),疯牛病(BSE)及鹿的退行性疾病(CWD),都以神经元死亡,神经胶质细胞增生,朊蛋白的聚集沉积为特征。很多证据证明传播性海绵状脑病是由于细胞表面的正常蛋白(PrPc)转变为具有感染性的蛋白酶抗性形式(PrPsc)引起。由于微管相关蛋白tau与传播性海绵状脑病中的GSS以及Ⅱ型CJD的发病有关,而MAP2与tau结构相近,功能相似,与微管结合,从而稳定微管,发挥一系列生物学功能的微管结合区氨基酸序列同源性达到60%～80%,提示了MAP2参与Prion疾病的可能性。所以,为了研究MAP2与Prion疾病的关系,我们从人的神经胶质瘤细胞SF126中提取了细胞总RNA,由AMV反转录得到cDNA,利用一对特异性引物扩增出人MAP2微管结合区基因,经测序和双酶切鉴定正确后,构建了原核表达载体pET32a-MAP2,对其进行诱导表达,并利用Ni Sepharose FF纯化了MAP2微管结合区蛋白。为了验证重组表达的MAP2微管结合区蛋白的生物活性,提取了兔脑组织中的微管蛋白,利用免疫共沉淀和ELISA等技术证明重组表达的MAP2微管结合区蛋白能够与天然状态的微管蛋白在体外发生相互作用,保留了天然MAP2结合微管的性质。为了研究MAP2与Prion疾病的关系,进行原核表达并纯化了不同长度的PrP蛋白PrP 23-231和PrP 91-231,利用免疫共沉淀和ELISA等技术证明MAP2通过微管结合区能够与PrP相互作用,其作用具有特异性。在此基础上,提取了叙利亚仓鼠脑组织中的正常prion蛋白,通过免疫共沉淀证明MAP2通过微管结合区能够与天然状态的prion蛋白相互作用。综上所述,实验结果说明MAP2与prion蛋白能够在本实验体系中发生相互作用,这为进一步研究MAP2与Prion疾病的关系及MAP2在Prion疾病神经退行性变发生过程中的作用奠定良好的基础。