猪瘟病毒感染靶细胞的配体表位研究

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猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起猪的高度接触性、致死性疾病。CSFV是黄病毒科、瘟病毒属成员之一,Erns、E1和E2是CSFV的三种主要结构蛋白,此三种结构蛋白与病毒的吸附和侵入靶细胞有关。为确定CSFV与病毒受体结合的具体配体表位信息,本研究利用生物信息学技术分析CSFV Erns、E1和E2三种蛋白一级结构的氨基酸序列,设计合成10条多肽,涵盖以上三种蛋白的所有序列,以PK-15细胞为靶细胞,进行多肽与靶细胞结合试验和病毒阻断试验筛选鉴定CSFV的配体表位;然后通过多肽抑制CSFV感染PK-15细胞试验测定其感染抑制功能。结果显示,E2蛋白上的一段多肽SE24在0.2mmol/L、0.1mmol/L、0.05mmol/L和0.025mmol/L浓度下能有效结合PK-15细胞;病毒阻断试验显示CSFV可以阻断多肽SE24结合PK-15细胞,与结合试验相比,阳性细胞数减少了11.6%,平均荧光强度降低了3.07;多肽抑制CSFV感染试验表明多肽SE24可以抑制CSFV感染PK-15细胞,具有感染抑制功能。通过结合试验、病毒阻断试验和感染抑制试验成功筛选出一条CSFV配体表位SE24 ,位于E2蛋白上,氨基酸序列为VHASDERLGPMPCRPKEIGSSAGPVRKTSCTFNYAKTGKNKYYEPRDSYF;并且配体表位SE24多肽能够抑制CSFV感染PK-15细胞,随着多肽浓度的增加感染率降低,具有剂量依赖性,浓度在0.2mmol/L时可以完全抑制病毒感染靶细胞。
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