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目的:从中药功劳木提取物中筛选出具有逆转肿瘤多药耐药活性的单体成分,研究其逆转肿瘤多药耐药作用,并探讨其逆转肿瘤多药耐药作用机制。方法:通过高内涵活细胞成像系统检测功劳木提取物对人白血病K562/ADM细胞内罗丹明123(rhodamine123,Rh123)蓄积的影响,筛选具有抑制K562/ADM细胞膜上P-gp功能的活性成分;MTT法检测功劳木活性成分对K562及K562/ADM细胞的无毒剂量以及对阿霉素(adriamycin,ADM)的耐药逆转作用;高内涵系统检测功劳木活性成分对ADM在K562/ADM细胞内蓄积的影响;Rh123蓄积实验进一步检测活性成分对P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gP)功能的影响; PI/Hoechst33342双染法检测功劳木活性成分对ADM诱导肿瘤细胞凋亡的影响;半定量RT-PCR法检测功劳木活性成分对K562/ADM细胞MDR1耐药基因表达的影响。结果:1.从功劳木提取物中筛选出6种具有抑制K562/ADM细胞膜上P-gp功能的活性成分,其中活性最强的为DMAG,本论文即研究该化合物对K562/ADM细胞的MDR的逆转作用。2. MTT检测结果显示,0.1μmol/L为DMAG的无毒剂量,其对K562细胞和K562/ADM细胞的抑制率均<10%。在无毒剂量及其以下设置5个浓度(0.01μmol/L、0.02μmol/L、0.04μmol/L、0.08μmol/L、0.1μmol/L)分别与ADM联用,可浓度依赖性地逆转K562/ADM细胞的耐药性(逆转倍数分别为3.17、3.99、5.01、6.14、6.45),其逆转作用明显强于阳性对照维拉帕米(Verapamil)。3. ADM蓄积实验检测结果显示耐药细胞内荧光信号明显减少,而经DMAG处理后逐渐恢复到接近敏感株细胞的水平,表明DMAG能直接抑制P-gp的功能,恢复ADM在细胞内的正常分布而达到逆转耐药的目的。4. Rh123蓄积实验检测结果显示无毒剂量的DMAG可剂量相关性增加耐药细胞株K562/ADM细胞内Rh123的蓄积,对K562细胞内Rh123的蓄积没有影响。5.无毒剂量的DMAG单独使用时对K562和K562/ADM细胞凋亡没有影响,与ADM联用后均可增强ADM诱导的K562/ADM细胞凋亡,作用明显强于单用ADM引起的细胞凋亡,与ADM联用后对K562细胞的凋亡同只用ADM引起的细胞凋亡相当。6.半定量RT-PCR法检测结果显示DMAG作用前后K562/ADM细胞内MDR1基因表达水平有下调趋势,且随浓度增加下调趋势逐渐明显。结论:1.功劳木提取物DMAG具有较强的逆转人白血病K562/ADM细胞多药耐药活性。2. DMAG通过下调MDR1基因及其蛋白产物P-gp的表达水平、抑制K562/ADM细胞膜上P-gp的外排功能,恢复P-gp介导的肿瘤多药耐药细胞株对药物的敏感性,增加细胞内ADM浓度,提高ADM对耐药细胞的诱导凋亡作用,逆转肿瘤细胞的多药耐药。