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目的Calpain是一种与破骨细胞活化相关的蛋白水解酶,可能是抑制破骨细胞活化的干预靶点。本研究旨在探讨Calpain在小鼠RAW264.7细胞中对RANKL诱导的破骨细胞分化的作用机制,以及抑制Calpain对RANKL诱导的破骨细胞活化的作用。方法在小鼠RAW264.7细胞中,分为以下6组:RANKLO ng/ml,20ng/ml,50ng/ml,70ng/ml,100ng/ml, RANKL50ng/ml+Calpastatin50nM,共诱导细胞分化6天。在第2天对RANKLO-100ng/ml共5组测定Calpain活性,在第6天对所有6组进行TRAP染色和阳性细胞计数、破骨细胞骨凹陷分析,验证破骨细胞是否分化成熟。另培养小鼠RAW264.7细胞,均使用RANKL50ng/ml进行诱导,分为4组：RANKL6h, RANKL24h, RANKL48h,[RANKL+Calpastatin50nM]48h,使用Western Blot方法测定各组的NFκB和c-Fos的蛋白表达,比较Calpastatin抑制前后两种蛋白表达量的变化。结果在小鼠RAW264.7细胞中,Calpain活性和TRAP阳性细胞数以及骨凹陷面积均呈RANKL浓度依赖性递增。使用Calpastatin抑制Calpain活性后与单纯以RANKL诱导相比,可以使TRAP阳性细胞数和骨凹陷面积显著降低。此外,随着RANKL诱导时间的延长,NFκB和c-Fos的蛋白表达水平均呈递增趋势。而以Calpastatin抑制Calpain活性后与单纯以RANKL诱导相比,此两种蛋白的表达量显著降低。结论在RANKL诱导的小鼠RAW264.7细胞分化体系中,Calpain活性与破骨细胞活化程度呈正相关。抑制Calpain可以有效抑制小鼠RAW264.7细胞在RANKL诱导下向破骨细胞的分化。抑制Calpain可以抑制RANKL诱导的NFKB和c-Fos蛋白表达的增加。