鸡prdm1表达和功能的相关研究

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PRDM1(positive regulatory domain1)是一个具有典型正性调控结构域和锌指结构的转录因子,已经在许多物种中得到鉴定,并且在细胞生长、分化,胚胎发育中有重要影响。此外,PRDM1是小鼠生殖细胞特化的关键因子。然而,鸟类胚胎发育中PRDM1的表达模式和功能还没有充分研究,鸟类生殖细胞的起源也尚未定论。因此,我们研究鸡发育过程中各个组织尤其是生殖系中PRDM1的时空表达,并研究其过表达对鸡胚发育和DF-1细胞细胞周期的影响。我们的结果表明prdm1mRNA表达于鸡的胚盘细胞和各个组织,包括:肝、皮、肺、肾、眼、法氏囊、脾脏、腺胃、肌胃、肠、睾丸、卵巢、舌、羽毛和胸腺。但是在大脑,心脏,骨骼肌中几乎检测不至prdml mRNA的表达。在所有检测的组织中,第X期的胚盘细胞中prdml mRNA的表达水平最高。许多组织的发育过程中prdm1mRNA的表达水平有显著变化,比如胚盘、法氏囊、脾、羽毛和生殖系。此外,Western blot和免疫组织化学检测PRDM1蛋白的表达结果基本一致,并且和mRNA结果类似,肌胃除外。免疫组化检测结果显示PRDM1位于平滑肌中。另外,在生殖系发育中,PRDM1持续表达于第X期的假定的原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)、血液中的PGCs及性腺中的生殖细胞。鸡中PRDM1的表达图式表明其在发育过程中可能有重要作用,比如胚盘细胞分化,羽毛形成和生殖细胞特化。为此,我们构建了慢病毒载体GV208-PRDM1,通过胚盘微注射和血管微注射两种方法制备PRDM1过表达的转基因鸡,检测其对鸡胚发育的影响。结果显示两种方法对照组(GFP)中均有荧光表达,而实验组中均没有看到绿色荧光表达。分子检测实验表明血管注射实验组15只个体中有8只个体的基因组中检测到外源性prdm1的存在,但没有检测到其mRNA的表达。这些结果表明外源性prdm1在鸡胚中的沉默可能是由于鸡体内转录水平或转录后水平的调控造成的。此外,我们构建了pEGFP-N1-PRDM1表达载体转染DF-1细胞,研究PRDM1对细胞周期的影响。结果表明DF-1细胞系中没有内源性PRDM1表达,并且外源性PRDM1特异性地表达在细胞核上。PRDM1过表达能增加G0/G1的细胞比例。转染pEGFP-Nl-PRDMl24小时后,p53、mdm2、Rb和e2f-1的mRNA表达水平均显著上升。有趣的是,Cyclin C和Cyclin D2mRNA表达水平显著上调,其它细胞周期蛋白基因的mRNA水平也有所上调,但无显著差异。此外,PRDM1过表达能抑制细胞增殖并改变细胞形态。这些结果表明DF-1细胞系中PRDM1过表达可能通过影响包括p53和Rb通路在内的多种机制诱导G0/G1停滞。
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