苏云金芽胞杆菌对家蚕杀虫活性中肠道菌MB1的增效作用

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苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)是一种可以伴随芽胞形成而产生伴胞晶体的革兰氏阳性菌。相关学者对Bt杀虫活力的提高做了大量的研究,并取得了系列进展,同时对Bt杀虫机制的研究也提出了不同的作用模型,如饥饿模型与败血症模型。近年来,研究者提出了肠道菌对Bt的杀虫活性具有重要影响的假说:即肠道菌对Bt杀虫活性具有增效作用或抑制作用,但肠道菌对Bt杀虫活性的影响没有形成一致的认识,其作用机理更不明确。本文利用所分离的家蚕(Bombyx mori)肠道菌系统比较了其对Bt杀虫活性的影响,发现一株对Bt杀虫活性具有增效作用的肠道菌MB1,且对MB1的增效作用机制进行了初步的研究,旨在阐明肠道菌MB1对Bt杀虫活性的增效作用及其作用机制。1.通过对蚕卵体表消毒的方法建立了未接触抗生素的无菌家蚕,为准确获取肠道菌对Bt杀虫活性的影响以及后续研究提供材料。2.通过生物测定,获得对Bt杀虫活性具有增效作用的肠道菌MB 1。通过对两种不同处理无菌家蚕的研究,发现抗生素对Cry蛋白杀虫活性存在显著影响,在家蚕的终死亡率与死亡速度上,抗生素显著降低家蚕对Cry蛋白的敏感性。此外,肠道菌MB1和Bt芽胞对Cry蛋白杀虫活性具有良好的协同作用,而芽胞本身对家蚕无任何影响,具体作用机制尚不清楚。3.我们进行了肠道菌MB1对Bt杀虫活性增效作用机制的研究,首先通过家蚕肠道菌定殖实验发现肠道菌MB1的增效作用并不是由于定殖数量优势而起作用,而可能与其菌株自身特性相关;通过比较肠道菌MB1对Cry原毒素和Cry活化蛋白杀虫活性的影响,结果发现,肠道菌MB1对Cry活化蛋白杀虫活性无显著影响,而对Cry原毒素杀虫活性具有显著的影响,这说明肠道菌MB1在Cry原毒素激活过程中可能起到一定的增效作用。4.对肠道菌MB1和BMB171在家蚕血淋巴液中生长情况进行检测,结果发现肠道菌MB1和BMB171都能在家蚕血淋巴液中生长,这可能与MB1的增效作用以及Bt属于昆虫病原菌的属性相关。5.本研究将肠道菌MB1和BMB171菌体注入家蚕血淋巴腔中观察其死亡情况,结果发现,向家蚕血淋巴腔中注入BMB171较肠道菌MB1更容易引起家蚕的死亡,且家蚕的死亡率与菌体数量具有正相关性。综上,肠道菌MB1对Bt杀虫活性的增效作用可能与其能够在血淋巴液中生长,且达到一定数量进而导致家蚕死亡有关。
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