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目的:血脑屏障（blood-brain barrier,BBB）完整性的破坏已成为实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）和人类多发性硬化（multiplesclerosis,MS）发病机制中的重要环节。抗原特异性T淋巴细胞（T lymphocyte,TLC）突破了受损的BBB进入中枢神经系统（central nervous system,CNS）释放炎性介质,这不仅打破了CNS相对稳定的内环境而且成为介导炎症性髓鞘脱失的关键步骤。本实验应用雌激素类药物雌二醇（estradiol,E2）治疗Wistar大鼠去卵巢后EAE,观察其临床疗效和潜在的免疫学机制,目的在于探讨EAE的发病机制和应用E2治疗EAE的作用机制,为EAE和MS的免疫病理机制提供新的理论支持,也为今后临床应用雌激素辅助治疗MS等CNS自身免疫性疾病提供实验依据。方法:制备去卵巢后10天的EAE动物模型,随机分为EAE组、E2治疗组和佐剂组。E2治疗组从免疫后（post-inoculation,p.i.）0～5天每日肌注E2（250μg/kg）一次。观察各组在不同时间点的血清E2浓度及血清和脑脊液中白蛋白含量比值（CSF to serum albuminquotient,QA）,通过QA评定BBB的损害。按照国际通用的五分法评估临床症状,观察体重变化、发病率等临床指标。在p.i.6、8、10、12、14、16天处死动物,取脑和脊髓用免疫组化技术检测CNS中不同部位细胞间粘附分子-1（intercellular adhension molecule-1,ICAM-1）和干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）的表达,并对EAE组ICAM-1和IFN-γ进行相关分析。结果:1.大鼠去卵巢后血清E2水平在短时间（16天）内迅速下降,经E2（250μg/kg.d）连续补充6天后其水平迅速升高,当E2补充停止其又以较快的速度（6天）代谢至去卵巢后低水平状态。在p.i.6天,EAE组血清E2水平为38.68±6.87pmol/l,较未去卵巢大鼠（137.60±20.95pmol/l）显著下降（t=10.03,P＜0.01）表明去卵巢手术成功。在p.i.6天、p.i.8天、p.i.10天,E2治疗组血清E2水平较EAE组显著升高,分别为1981.40±95.36pmol/l、499.20±16.67pmol/l、161.00±11.36pmol/l,与EAE组比较有统计学差异（F=1666.49,P＜0.01）。在p.i.12天,E2治疗组血清E2代谢至33.18±10.92pmol/l,处于去卵巢后低水平状态。2.EAE组发病率73%,平均体重减轻15.40±4.03g,平均症状评分2.07±1.67分,平均病灶数15.00±1.93个,平均发病日期13.60±1.18天。在p.i.12天开始出现明显的临床症状,起病突然,发病轻重不一,表现有尾麻痹、后肢无力、体重下降等。在p.i.14天左右发展为发病高峰期,进一步表现为后肢瘫痪、易激惹、体重迅速下降,个别处于濒死状态。在p.i.16天左右病情开始缓解,临床症状减轻,体重开始回升,相应的临床症状评分、发病率下降。E2治疗组发病率27%,较EAE组降低（X2=6.53,P＜0.05）;平均体重减轻6.73±3.53g,较EAE组减少（t=6.26,P＜0.01）;平均症状评分0.53±0.92分,较EAE组降低（t=2.93,P＜0.01）:平均病灶数7.67±3.15个,较EAE组减少（t=7.68,P＜0.01）;平均发病日期15.07±0.88天,较EAE组延迟（t=3.85,P＜0.01）。这5项临床指标比较,E2治疗组与EAE组均有统计学差异。佐剂组未见发病,体重呈增长趋势。3.EAE组、E2治疗组和佐剂组QA值均出现先升高后下降的变化趋势。EAE组在p.i.8天时QA值达到最大值（0.31±0.07）,BBB受损较重,之后随着免疫时间的延长,QA值逐渐下降,BBB的功能逐渐恢复。E2治疗组免疫后初期QA值仅有小幅度的增加,在以后的免疫时间里QA值缓慢增高,在p.i.14天时达到最大值（0.20±0.04）,但增幅较小,出现峰值的时间较EAE组延迟,BBB受损较轻。佐剂组QA值在免疫后初期虽然也出现增高,但升高幅度明显低于EAE组。经两因素多水平方差分析统计表明:在p.i.6～16天,EAE组与E2治疗组比较QA值总的变化趋势有统计学差异（F=26.20,P＜0.01）;EAE组与佐剂组比较QA值总的变化趋势有统计学差异（F=4.78,P＜0.01）。4.ICAM-1在EAE组、E2治疗组和佐剂组的血管内皮细胞中均有表达,且表达程度与病情轻重相一致。当其表达增加时,表现为在扁平的血管内皮细胞周围着色加深。经图像分析显示,EAE组ICAM-1阳性染色平均灰度值在p.i.14天时达到最小值131.87±18.56,此时E2治疗组也有所下降（153.20±15.41）,但下降较缓慢,与EAE组比较有统计学差异（F=26.67,P＜0.01）。经两因素多水平方差分析统计表明:在p.i.10～16天,EAE组与E2治疗组ICAM-1阳性染色平均灰度值比较有统计学差异（F=21.01,P＜0.01）,表明E2治疗组ICAM-1表达明显低于EAE组;在p.i.10～16天,EAE组与佐剂组ICAM-1阳性染色平均灰度值比较有统计学差异（F=159.93,P＜0.01）,表明EAE组ICAM-1的表达明显高于佐剂组。5.IFN-γ主要由进入CNS的淋巴细胞产生,免疫组化染色阳性表达表现为血管渗出的淋巴细胞周围有不同程度着色,且表达程度与病情轻重相一致。经图像分析显示,EAE组IFN-γ阳性染色平均灰度在p.i.14天时达到最小值116.21±19.26,此时E2治疗组也有所下降（138.28±17.37）,但下降较缓慢,与EAE组比较具有统计学差异（F=19.28,P＜0.01）。经两因素多水平方差分析统计表明:在p.i.10～16天,EAE组与E2治疗组IFN-γ阳性染色平均灰度值比较有统计学差异（F=26.19,P＜0.01）,表明E2治疗组IFN-γ表达明显低于EAE组;在p.i.10～16天,EAE组与佐剂组IFN-γ阳性染色平均灰度值比较有统计学差异（F=196.56,P＜0.01）,表明EAE组IFN-γ的表达明显高于佐剂组。相关统计分析显示:在p.i.6～p.i.16天,EAE组ICAM-1与IFN-γ的阳性表达具有显著正相关性（r=0.87,P＜0.01）结论:1.去卵巢后EAE血清E2水平降低,经E2补充后明显升高,当E2补充停止后又以较快的速度代谢至去卵巢后低水平状态。2.继早期BBB损伤高峰之后,EAE临床症状开始出现并逐渐加重。3.EAE早期（p.i.8～10天）EC已有少量ICAM-1表达,在p.i.14天时表达最大,说明病情处于较重期,这与临床症状的严重程度相一致。4.EAE早期CNS中已有少量IFN-γ表达,活动期表达增加,病情减退表达随之下降。IFN-γ与ICAM-1的表达具有正相关性。5.E2能够有效抑制EAE。E2通过抑制活化的EC和TLC而下调ICAM-1和IFN-γ的表达,进而恢复BBB的正常功能和促使Th细胞发生转分化。