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cIAP1和cIAP2是从TRAF2(肿瘤坏死因子受体)相关性蛋白中被鉴定出来的凋亡抑制蛋白(Inhibitor of Apoptosis Proteins,IAPs)家族的成员;c-IAP1和c-IAP2均定位于11q22-23。目前cIAP1/2在膀胱癌中的研究鲜见报道。在前期的研究中我们发现细胞核中cIAP1(cIAP1-N)的表达与膀胱癌的分期明显正性相关,此项结果国际国内均未见报道;为进一步证实cIAP1/2在膀胱移行细胞癌中的表达情况及其临床意义,本文设计并进行下列研究。
目的:
(1)检测不同分期膀胱移行细胞癌患者临床标本中cIAP1与cIAP2的表达并行多因素统计分析。(2)检测cIAP2基因在膀胱癌细胞系中的表达情况,观察cIAP2基因对膀胱癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响。(3)检测cIAP1基因对膀胱癌细胞增殖、凋亡以及化疗敏感性的调节作用,并检测其对膀胱癌细胞周期的影响。
方法:
(1)选取膀胱移行细胞癌组织标本102例作为实验组,选取同期行耻骨上经膀胱前列腺切除术的良性前列腺增生患者的正常膀胱粘膜组织32例作为对照组。应用免疫组化技术检测cIAP1与cIAP2的表达;多因素统计分析cIAP1/2的表达与膀胱癌临床病理学特征之间的关系;(2)RT-PCR检测cIAP2在膀胱癌细胞系T24、EJ、5637及BIU-87中的表达情况;Western blot进一步检测cIAP2蛋白在上述四种细胞系中的表达情况;MTT、TUNEL实验检测cIAP2缺失或过表达对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响,并检测cIAP2对药物丝裂霉素化疗敏感性的影响。(3)应用相同的方法检测cIAP1在膀胱癌细胞系T24、EJ、5637及BIU-87中的表达情况;同时检测cIAP1缺失或过表达对膀胱癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响,并应用流式细胞检测下调cIAP1的表达对膀胱癌细胞T24细胞周期的影响。
结果:
1.统计学分析表明:相对于正常膀胱上皮组织,cIAP1l与cIAP2的表达在膀胱癌中显著增加;cIAP1(cIAP1-N)的细胞核染色与肿瘤的分期和分级密切相关;cIAP1-N的表达与K167的表达密切相关。
2.RT-PCR结果显示,在四种膀胱癌细胞系T24、EJ、5637及BIU-87中,cIAP2有所表达,Western blot的结果进一步证实了cIAP2在蛋白水平的表达;应用脂质体转染使T24细胞中cIAP2过表达之后,MTT结果显示T24细胞的增殖能力增强,TUNEL结果显示T24细胞的自发性凋亡减少;在T24细胞中应用RNA干扰技术抑制cIAP2的表达之后,MTT结果显示T24细胞的增殖能力下降,TUNEL结果显示T24细胞的自发性凋亡轻度增加;TUNEL实验表明,下调cIAP2的表达能够显著提高T24细胞对化疗药物丝裂霉素的凋亡敏感性;
3.RT-PCR、Western blot结果显示,在四种膀胱癌细胞系T24、EJ、5637及BIU-87中cIAP1有所表达;应用脂质体转染使T24细胞中cIAP1过表达之后,MTT结果显示T24细胞的增殖能力增强,TUNEL结果显示T24细胞的自发性凋亡减少;在T24细胞中应用RNA干扰技术抑制cIAP1的表达之后,MTT结果显示T24细胞的增殖能力下降,TUNEL结果显示T24细胞的自发性凋亡轻度增加并且T24细胞对化疗药物丝裂霉素的凋亡敏感性增强;流式细胞结果显示下调cIAP1的表达之后可使G0/G1期细胞增加,而S期细胞减少(P＜0.05)。
结论:
1.细胞核中cIAP-1的表达与膀胱移行细胞癌的分期、分级密切相关。
2.下调cIAP2在T24细胞中的表达可以有效的抑制膀胱癌的生长,提高T24细胞对化疗药物丝裂霉素的凋亡敏感性。
3.下调cIAP1在T24细胞中的表达可以抑制膀胱癌的生长,并且对T24细胞的细胞周期产生影响。