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目的：
广泛应用于各行业的全氟辛酸（perfluorooctanoateacid，PFOA）可导致持续性的环境污染，该物质可通过食物和饮用水进入人及动物体内导致毒性蓄积而引发疾病。本研究旨在观察PFOA对体外培养的人横纹肌肉瘤RD细胞的增殖、迁移及侵袭的影响，并探讨其潜在的作用机制。
方法：
1.应用不同浓度PFOA作用体外培养的RD细胞一定时间后，使用细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK8）检测细胞活力并确定PFOA作用浓度；使用该浓度PFOA处理RD细胞，通过划痕实验和细胞体外侵袭（Transwell）实验分别评估细胞的迁移和侵袭能力，流式细胞术检测细胞周期的分布，实时荧光定量PCR（qPCR）检测迁移侵袭及周期相关基因mRNA表达差异，蛋白质免疫印迹（WesternBlot，WB）检测相关蛋白水平表达差异。
2.应用PI3K抑制剂BEZ235与PFOA共同作用于RD细胞，CCK8、划痕实验和Transwell侵袭实验评估细胞活力、细胞的迁移和侵袭能力，AnnexinV-FITCPI双染流式细胞术检测细胞凋亡，qPCR和WesternBlot检测PI3K/AKT及其下游相关基因mRNA和蛋白水平表达差异。
结果：
1.CCK8结果显示不同浓度PFOA作用RD细胞72h后，呈现出低浓度PFOA（1、10、50、100μmol/L）促进、高浓度PFOA（250、500μmol/L）抑制细胞增殖的趋势，与对照组相比，PFOA（50μmol/L）组对RD细胞的增殖呈现促进作用（P＜0.001）。流式细胞术结果显示PFOA（50μmol/L）作用RD细胞72h后，G0/G1期细胞无明显差异，S期细胞减少，G2/M期细胞增加。S期及G2/M期相对比例在PFOA组与对照组之间差异具有统计学意义（P＜0.01）。qPCR及WesternBlot结果显示在mRNA水平及蛋白水平，与对照组相比，PFOA（50μmol/L）组的细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶2（CDK2）及细胞周期蛋白E2（cyclinE2）相对表达量增加，差异具有统计学意义（P＜0.01）。p21、p53在mRNA及蛋白表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。划痕实验结果显示，PFOA（50μmol/L）组的划痕愈合速度明显加快，其相对迁移面积大于对照组（P＜0.001）；Transwell侵袭试验结果显示，与对照组相比，PFOA（50μmol/L）组细胞穿过聚碳酸酯膜增多（t=54.4,P＜0.001），侵袭能力明显增强。qPCR及WesternBlot结果显示在mRNA及蛋白水平，与对照组相比，PFOA（50μmol/L）组的波形蛋白（vimentin）及基质金属蛋白酶2（MMP2）相对表达量增加，差异具有统计学意义（P＜0.05）。
2.PFOA（50μmol/L）作用于RD细胞后，在mRNA及蛋白水平，PI3K和AKT的表达上调。BEZ235可抑制RD细胞中PI3K与AKT的表达。PFOA与BEZ235处理组显示，BEZ235可抑制PFOA对PI3K/AKT表达的促进作用。随时间推移，PFOA对于RD细胞增殖的促进作用更加显著。PFOA与BEZ235共同作用于RD细胞时，BEZ235完全消除了PFOA对于RD细胞增殖的促进作用。PFOA（50μmol/L）组的划痕愈合速度明显加快，BEZ235可部分抑制PFOA对RD细胞迁移能力的作用，其相对迁移量大于对照组而小于PFOA组；Transwell侵袭试验结果显示对照组、PFOA组、PFOA+BEZ235组与BEZ235组穿过小室细胞数分别为80.30±4.08、209.60±2.51、102.40±2.50、35.80±11.56，各组比较差异具有统计学意义（F=579.3，P＜0.001）。与对照组相比，PFOA组细胞侵袭能力明显增强（q=29.21，P＜0.001），而BEZ235可抑制PFOA对RD细胞侵袭的促进作用，PFOA+BEZ235共同处理RD细胞后，其过膜细胞数仍大于对照组，差异具有统计学意义（q=10.93，P＜0.001）。对照组、PFOA组、BEZ235组、PFOA+BEZ235组凋亡比例（%）分别为：11.63±0.21、5.10±1.08、19.60±4.45、7.03±0.45。与对照组相比，PFOA组RD细胞凋亡比例降低（q=3.47，P＜0.05），BEZ235组RD细胞凋亡比例明显升高（q=39.19，P＜0.001）；而PFOA+BEZ235组凋亡比例处于PFOA组与对照组之间，与对照组相比差异无统计学差异（q=2.44，P=0.095）。qPCR与WesternBlot结果显示，与对照组相比，在mRNA及蛋白水平，PFOA组细胞Bcl-2表达上调，Bax、Beclin-1表达下调，其差异均具有统计学意义（P＜0.001）；BEZ235与PFOA共同处理RD细胞后，BEZ235逆转了PFOA对于此三种凋亡相关蛋白表达的影响。
结论：
低剂量PFOA（50μmol/L）暴露可激活RD细胞的PI3K/AKT信号通路，上调CyclinE2、CDK2等细胞周期蛋白的表达促进细胞周期的转换；上调Bcl-2，下调Bax、Beclin-1等凋亡相关蛋白抑制细胞凋亡过程，上调MMP-2、vimentin等上皮间质转化相关蛋白促进EMT发生，从而促进横纹肌肉瘤RD细胞的增殖、侵袭迁移。
广泛应用于各行业的全氟辛酸（perfluorooctanoateacid，PFOA）可导致持续性的环境污染，该物质可通过食物和饮用水进入人及动物体内导致毒性蓄积而引发疾病。本研究旨在观察PFOA对体外培养的人横纹肌肉瘤RD细胞的增殖、迁移及侵袭的影响，并探讨其潜在的作用机制。
方法：
1.应用不同浓度PFOA作用体外培养的RD细胞一定时间后，使用细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK8）检测细胞活力并确定PFOA作用浓度；使用该浓度PFOA处理RD细胞，通过划痕实验和细胞体外侵袭（Transwell）实验分别评估细胞的迁移和侵袭能力，流式细胞术检测细胞周期的分布，实时荧光定量PCR（qPCR）检测迁移侵袭及周期相关基因mRNA表达差异，蛋白质免疫印迹（WesternBlot，WB）检测相关蛋白水平表达差异。
2.应用PI3K抑制剂BEZ235与PFOA共同作用于RD细胞，CCK8、划痕实验和Transwell侵袭实验评估细胞活力、细胞的迁移和侵袭能力，AnnexinV-FITCPI双染流式细胞术检测细胞凋亡，qPCR和WesternBlot检测PI3K/AKT及其下游相关基因mRNA和蛋白水平表达差异。
结果：
1.CCK8结果显示不同浓度PFOA作用RD细胞72h后，呈现出低浓度PFOA（1、10、50、100μmol/L）促进、高浓度PFOA（250、500μmol/L）抑制细胞增殖的趋势，与对照组相比，PFOA（50μmol/L）组对RD细胞的增殖呈现促进作用（P＜0.001）。流式细胞术结果显示PFOA（50μmol/L）作用RD细胞72h后，G0/G1期细胞无明显差异，S期细胞减少，G2/M期细胞增加。S期及G2/M期相对比例在PFOA组与对照组之间差异具有统计学意义（P＜0.01）。qPCR及WesternBlot结果显示在mRNA水平及蛋白水平，与对照组相比，PFOA（50μmol/L）组的细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶2（CDK2）及细胞周期蛋白E2（cyclinE2）相对表达量增加，差异具有统计学意义（P＜0.01）。p21、p53在mRNA及蛋白表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。划痕实验结果显示，PFOA（50μmol/L）组的划痕愈合速度明显加快，其相对迁移面积大于对照组（P＜0.001）；Transwell侵袭试验结果显示，与对照组相比，PFOA（50μmol/L）组细胞穿过聚碳酸酯膜增多（t=54.4,P＜0.001），侵袭能力明显增强。qPCR及WesternBlot结果显示在mRNA及蛋白水平，与对照组相比，PFOA（50μmol/L）组的波形蛋白（vimentin）及基质金属蛋白酶2（MMP2）相对表达量增加，差异具有统计学意义（P＜0.05）。
2.PFOA（50μmol/L）作用于RD细胞后，在mRNA及蛋白水平，PI3K和AKT的表达上调。BEZ235可抑制RD细胞中PI3K与AKT的表达。PFOA与BEZ235处理组显示，BEZ235可抑制PFOA对PI3K/AKT表达的促进作用。随时间推移，PFOA对于RD细胞增殖的促进作用更加显著。PFOA与BEZ235共同作用于RD细胞时，BEZ235完全消除了PFOA对于RD细胞增殖的促进作用。PFOA（50μmol/L）组的划痕愈合速度明显加快，BEZ235可部分抑制PFOA对RD细胞迁移能力的作用，其相对迁移量大于对照组而小于PFOA组；Transwell侵袭试验结果显示对照组、PFOA组、PFOA+BEZ235组与BEZ235组穿过小室细胞数分别为80.30±4.08、209.60±2.51、102.40±2.50、35.80±11.56，各组比较差异具有统计学意义（F=579.3，P＜0.001）。与对照组相比，PFOA组细胞侵袭能力明显增强（q=29.21，P＜0.001），而BEZ235可抑制PFOA对RD细胞侵袭的促进作用，PFOA+BEZ235共同处理RD细胞后，其过膜细胞数仍大于对照组，差异具有统计学意义（q=10.93，P＜0.001）。对照组、PFOA组、BEZ235组、PFOA+BEZ235组凋亡比例（%）分别为：11.63±0.21、5.10±1.08、19.60±4.45、7.03±0.45。与对照组相比，PFOA组RD细胞凋亡比例降低（q=3.47，P＜0.05），BEZ235组RD细胞凋亡比例明显升高（q=39.19，P＜0.001）；而PFOA+BEZ235组凋亡比例处于PFOA组与对照组之间，与对照组相比差异无统计学差异（q=2.44，P=0.095）。qPCR与WesternBlot结果显示，与对照组相比，在mRNA及蛋白水平，PFOA组细胞Bcl-2表达上调，Bax、Beclin-1表达下调，其差异均具有统计学意义（P＜0.001）；BEZ235与PFOA共同处理RD细胞后，BEZ235逆转了PFOA对于此三种凋亡相关蛋白表达的影响。
结论：
低剂量PFOA（50μmol/L）暴露可激活RD细胞的PI3K/AKT信号通路，上调CyclinE2、CDK2等细胞周期蛋白的表达促进细胞周期的转换；上调Bcl-2，下调Bax、Beclin-1等凋亡相关蛋白抑制细胞凋亡过程，上调MMP-2、vimentin等上皮间质转化相关蛋白促进EMT发生，从而促进横纹肌肉瘤RD细胞的增殖、侵袭迁移。