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细胞色素P450酶(cytochrome P450, CYP450)是机体重要的药物代谢酶,涉及内源性和外源性物质以及几乎所有药物和其衍生物的代谢。另一方面,内源性、外源性化合物也能够诱导或抑制CYP450的表达,而严重影响着药物的代谢、疗效和安全性。CYP3A29是猪体内最重要最丰富的药物代谢酶之一,是人重要药物代谢酶CYP3A4的研究模型。干扰素(Interferon, IFN)作为新型生物药物已被广泛应用于医学临床及兽医临床,使用过程中通常需要与其它药物联合应用,以达到更好的效果,但其对机体药物代谢酶的表达调控机制尚不清楚,由此导致的药物代谢酶的表达及活性的变化严重影响着对药物的代谢、疗效和安全性,经常导致药效降低、产生毒副反应及药物残留,给临床合理用药带来了很大困难,既造成了药物的浪费,又严重影响人和动物的健康。因此研究干扰素对猪CYP3A29表达调控的影响及其机制的调节,既能指导兽医临床用药,又能为医学临床合理用药提供理论依据。本研究从细胞水平及动物活体水平研究了干扰素对CYP3A29表达的影响,并探讨了其分子机制,取得的结果如下：1. IFN-a与IFN-y在细胞水平对CYP3A29表达的影响分离制备猪肝原代细胞,MTT还原法分别检测IFN-a与IFN-y对猪肝细胞活性影响,证实IFN-a与IFN-y对其无细胞毒性作用；分别用不同剂量IFN-a与IFN-y在不同时间点处理猪原代肝细胞和传代肝细胞HepLi,应用实时荧光定量PCR和Westen-blot检测肝细胞的CYP3A29在mRNA水平和蛋白质的变化,结果表明IFN-a与IFN-y均能显著上调CYP3A29表达,且具有一定的时间、剂量相关性。2. IFN-a与IFN-y在动物活体水平对CYP3A29表达及酶活性的影响分别用IFN-a与IFN-y肌肉注射30日龄仔猪,采用差速离法(Differential celltrifugation method)制备猪肝微粒体。应用实时荧光定量PCR和Westen-blot测定CYP3A29mRNA和蛋白质水平变化,结果表明IFN-a与IFN-y均能显著上调CYP3A29表达,且与细胞水平相一致；以人CYP3A4的特异性底物硝苯地平作为探针,尼群地平作为内标,用高效液相色谱法测定硝苯地平氧化代谢产物氧化型硝苯地平含量,分析CYP3A29酶活性变化,表明猪CYP3A29基因与人CYP3A4基因致,具有硝苯地平氧化代谢活性,且IFN-a与IFN-y能激活CYP3A29酶代谢活性。3. IFN-a与IFN-y对孕烷受体PXR表达的影响分别用不同剂量IFN-a与IFN-y在不同时间点处理猪原代肝细胞和传代肝细胞HepLi,应用实时荧光定量PCR和Westen-blot检测PXR在mRNA水平和蛋白质的变化,结果表明IFN-α与IFN-γ均能显著上调PXR表达,且与CYP3A29的表达具有一致性；动物实验样品荧光定量PCR和Westen-blot检测结果与细胞水平检测结果相一致。4. IFN-α与IFN-γ对CYP3A29表达调控机制分别构建PXR真核表达质粒pcDNA3.1-PXR及6个CYP3A29不同长度启动子荧光素酶报告质粒；在MTT还原法检测转录抑制剂DRB对猪肝细胞无细胞毒性作用基础上,通过转录抑制试验确定肝脏药物代谢酶CYP3A29的启动子在IFN-α与IFN-γ调控中的作用,采用细胞转染PXR真核表达质粒和siPXR使核受体PXR超表达或者沉默,转染不同长度的CYP3A29启动子片段,探讨IFN-α与IFN-γ上调CYP3A29表达的分子机制。实验结果表明：(1) IFN-α与IFN-γ通过激活CYP3A29启动子上调CYP3A29的表达,IFN-α与IFN-γ激活CYP3A29转录部位是位于转录起始上游-1473至-1021区域；(2) IFN-α与IFN-γ处理细胞后,PXR mRNA上调先于CYP3A29mRNA发生,推断PXR作为转录因子参与激活CYP3A29表达；(3)PXR超表达试验和RNA干扰试验表明IFN-α与IFN-γ激活CYP3A29的表达与核受体PXR相关。