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目的：柯萨奇病毒B组3型(CVB3)是引起人类病毒性心肌炎的主要病原体之一。目前尚无有效的防治方法可以保护人类免受这一病毒的危害。DNA疫苗的出现为建立有效的免疫预防措施提供了新的思路。根据国内外文献报道，我室选择了能够刺激机体产生保护性抗体的CVB3VP1蛋白作为侯选抗原，构建了pcDNA3-VP1真核表达重组质粒，并进行了免疫效果的观察。结果发现，尽管该DNA疫苗能诱导小鼠产生中和抗体，但仍存在抗体效价低，不能有效保护致死量病毒感染的问题。因此如何增强pcDNA3-VP1的免疫原性，提高其免疫保护率就成为亟待解决的关键问题。近几年来的许多研究表明，联合应用细胞因子可通过不同的环节调节和增强DNA免疫效应，发挥佐剂作用。IL-2是目前应用较广泛的一种细胞因子，对免疫应答具有广泛的上调作用。本研究的目的，就是构建双表达重组质粒pcDNA3／VP1-hIL-2，并观察IL-2基因佐剂对CVB3 VP1所诱导的免疫应答的调节作用，为构建有效预防柯萨奇病毒感染的DNA疫苗奠定实验基础。 方法：利用自行设计的产物，以已成功构建的CVB3病毒VP1基因重组DNA质粒pcDNA3／VP1为模板进行PCR反应，扩增出具有完整真核表达构件的CMV-VP1-BGHpA片段；将扩增产物回收纯化后，与pGEM 中文摘要T工asy载体连接，转化DH。。大肠杆菌，筛选重组子，提取质粒进行酶切鉴定和测序；将扩增片段双酶切，与同样双酶切的质粒pCDNA3／hIL上连接，转化DH允大肠杆菌，提取质粒酶切鉴定，即构建成双表达重组质粒pCDNA3／VP foIL上。质粒大量扩增纯化后，肌肉注射免疫BALB七 小鼠三次。每次免疫后第六天，断尾取血检测CVB3中和抗体、第二次免疫后第七大用致死量CVB3感染小鼠，观察 pCDNA3／VP foIL刁对小鼠的免疫保护作用。 结果：门）构建的 pCDNA3／VP foIL《重组质粒中的插入片段 CMV－VP IBGHpA的长度符合 1．9 kb的预期值，经酶切鉴定和测序证实该插入片段正确无误；门）pCDNA3／VPI人IL上重组质粒免疫小鼠后，能诱导机体产生中和抗体，各次免疫后的平均抗体效价分别为叫：5，1：ZS．281：45．95；pCDNA3／VPI＋ pCDNA3／hIL－2共注射组各次免疫后的平均抗体效价分别为叫j，卜26．Zg，1：42．8卜 而pCDNA3／VPI iii只在第。次免疫后出现低水平抗体，效价人 l：22．97。。3）Jll 800TCID50CVB3 感染小鼠，pCDNA3／VP foIL二 双农达质粒组，pCDNA3／VPI＋pCDNA3thIL上共注射组，pCDNA3／VP组，pCDNA30上组，pCDNA3组及生理盐水对照组生存率分别为 25％，10％，15％，5％，15％，10％；经／检验，六组小鼠生存率无明显差异（P＞0．05人 结论：门）本研究成功的构建了双表达真核重组质粒pCDNA3／VP foIL－2。（2）pCDNA3／VP foIL－2 t乡质粒在小鼠体内能够表达并能诱导机体产牛较单独的pCDNA3／VH 免疫绢出砚更宁、水平更高的中和抗休，且 中文摘要抗体效价随免疫次数增加而提高。门）在本研究所应用的免疫程序下，pCDNA3／VP lhlL上双表达质粒 DNA疫苗对致死量CVB3感染无明显保护作用。