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毛果杨(Popolus trichocarpa)具有基因组相对较小、染色体数目少、生长速度快、无性繁殖容易等特点,是第一个全基因组测序的木本植物,其遗传转化对木本植物功能基因组学的研究具有极其重要的意义。本研究分别以毛果杨组培苗的茎段和叶片作为外植体,研究了不同取材部位、接种方式及外源激素组合对不定芽诱导的影响,建立了高效的毛果杨组培再生体系。在此基础上探讨了菌液浓度、侵染时间、共培养时间、乙酰丁香酮浓度及添加方式对遗传转化率的影响,建立了高效的毛果杨遗传转化体系,并对转化植株进行了检测。本文的主要研究结果如下:1.以温室培养的毛果杨嫩枝为基础材料,确定了毛果杨枝条的最适无菌处理条件。用70%酒精消毒30 sec,再用3%NaClO消毒8 min,无菌水清洗3遍,最后用无菌滤纸吸干材料表面的水分,接种到生根培养基上,15d污染率为0。2.建立了毛果杨组培苗茎段和叶片直接诱导不定芽的再生体系。茎段分化的最佳取材部位是形态学上端第二、三节茎段,不定芽分化的最适培养基为WPM+0.03 mg·L-1 6-BA+0.02 mg·L-1 IBA+0.0008 mg·L-1 TDZ,培养25 d分化率达到100%,平均分化芽数为18.77,平均芽长为1.25 cm;叶片分化的最佳取材部位是形态学上端第三、四、五片叶,叶背向下接种,最适分化培养基为WPM+0.04 mg·L-1 6-BA+0.02 mg·L-1 IBA+0.001 mg·L-1 TDZ,培养25 d分化率达到100%,平均分化芽数为12.11,平均芽长为1.20cm;不定芽长至1-2 cm且有明显主茎时,接种到WPM+0.1 mg·L-1 IBA的生根培养基中,5-7 d开始生根,生根率为100%;3.建立了高效的遗传转化体系。确定了毛果杨外植体抗性芽分化及生根筛选过程中Kan的最佳选择压为30 mg·L-1,最适抑菌条件为200 mg·L-1 Cef;茎段外植体在菌液浓度OD600值为0.4的条件下侵染20 min,共培养2 d,在侵染及共培养过程中添加80 μmol·L-1的AS时转化率相对较高,转化率为26.7%。4.对毛果杨茎段外植体获得的抗性芽及抗性植株进行GUS染色,再将获得的28个抗性株系进行PCR及RT-PCR分子检测,结果表明,目的基因已成功整合到毛果杨基因组中。