荧光定量PCR检测儿童白血病骨髓GRIK2基因的表达

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背景:白血病是儿童和青少年中最常见的恶性肿瘤疾病,但其病因仍不清楚。因此,揭示白血病的发病机制对于防治白血病有重要意义。儿童白血病以急性淋巴细胞白血病(急淋)最为多见,文献已经报道儿童急淋细胞有多条染色体片段丢失,因此这些区域都可能存在肿瘤抑制基因(TSG)。本项目组近年来一直从事儿童急淋6q16.3-6q21缺失区段候选TSG的分离及功能研究。本实验主要探究位于6q16.3上的GRIK2基因作为急淋候选TSG,在白血病患儿、白血病细胞株和对照组骨髓中的表达情况进行检测。目的:实验应用荧光定量PCR(FQ-PCR)方法检测GRIK2基因在白血病患儿、白血病细胞株、对照组骨髓中的表达情况,分析骨髓中GRIK2基因产物的表达差异。方法:实验采用RT-PCR和FQ-PCR方法检测100例白血病患儿、3个白血病细胞株及30例对照的骨髓中GRIK2的表达。实验结果采用SPSS14.0软件进行x~2检验,P<0.05有统计学意义。结果:1.经RT-PCR检测到100例白血病患儿骨髓中GRIK2 mRNA表达阳性的仅有3例;3个细胞株均无阳性表达,30例对照中有3例阳性表达。经统计学分析,病例组与对照组之间的表达差异无统计学意义(P>0.05)。2.经FQ-PCR检测到100例白血病患儿骨髓中GRIK2 mRNA表达阳性的有6例,均无6q缺失;3种细胞株中Jurkat细胞株GRIK2mRNA表达阳性;30例对照患儿中GRIK2 mRNA表达阳性的仍是原3例。病例组、细胞株与对照组之间的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.初步认为GRIK2在白血病细胞和正常造血组织中表达无差异;2.GRIK2 mRNA在无6q缺失T细胞急淋(T-ALL)病人中比B细胞急淋(B-ALL)病人表达高,在有6q缺失的T-ALL和B-ALL病人中GRIK2的表达为阴性;3.FQ-PCR检测GRIK2 mRNA具有简便、快捷、高灵敏度等特点,较RT-PCR能更精确地反映出GRIK2 mRNA在骨髓中的含量;4.GRIK2基因是否为急淋的TSG有待进一步探讨,可采用更为先进的实验技术如荧光原位杂交技术(Fish)、基因芯片筛查等进行进一步研究。
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