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试验于2013-2015年在山东农业大学国家苹果工程中心、作物生物学国家重点实验室及山东省果树研究所(泰安)进行,以‘中油4号’(Prunus persica var.nectariana cv.Zhongyousiha)油桃为实验材料,通过同源比对的方式查找桃树基因组中调控ABA代谢的关键基因,利用realtime PCR技术检测ABA代谢关键基因在种子休眠以及芽休眠过程中的表达模式,然后比较异同。另外,我们还成功克隆了3个控制ABA分解的CYP707A基因家族成员,并成功诱导表达了其相应的蛋白,为以后进一步研究ABA8’-羟化酶的蛋白奠定了基础,同时获得桃CYP707A家族3个基因的过表达拟南芥植株。主要结果如下:(1)通过拟南芥中ABA代谢相关基因(ZEP,NCED,AAO,CYP707A,SDR1)的蛋白序列同源比对桃树基因组,根据保守性分析删除冗余序列,最终在桃树基因组中得到4个NCED家族基因类似成员、1个AAO基因家族成员、3个CYP707A家族基因成员,以及ZEP和SDR1的同源基因。(2)通过定量分析研究桃中ABA代谢相关基因在花芽以及叶芽休眠过程中的的表达模式,我们发现ABA代谢相关基因在叶芽和花芽休眠过程中具有相同的表达模式,其中,NCED家族基因在芽的休眠诱导以及深休眠阶段起到重要的调控作用,PpCYP707A2和PpCYP707A3在芽休眠解除阶段起到重要的调控作用。(3)利用荧光定量方法研究了桃中ABA代谢相关基因在种子休眠过程中的表达模式。结果显示,NCED家族成员在种子发育过程(种子休眠诱导)中表达水平逐渐升高,PpCYP707A2和PpCYP7073在种子休眠解除阶段表达量骤然升高,这与芽休眠的变化趋势是一致的,说明ABA控制芽休眠以及种子休眠存在着一定的共通性。(4)利用plantCARE在线启动子分析软件对桃中CYP707A家族3个基因的启动子进行分析,结果显示,这些基因的启动子都含有ABRE-motif和GARE-motif。利用GA3和ABA处理桃花芽后,只有PpCYP707A2能够被GA3和ABA所诱导。(5)构建正义植物表达载体PBI121-PpCYP707A1、PBI121-PpCYP707A2、PBI121-PpCYP707A3,采用农杆菌介导的方法,转化拟南芥,同时转空载体作为对照。经卡那霉素筛选获得若干再生植株,PCR鉴定发现PpCYP707A1、PpCYP707A2、PpCYP707A3在拟南芥中得到成功表达。(6)构建原核表达载体PGST-PpCYP707A1、PGST-PpCYP707A2,并且将重组表达载体成功转化大肠杆菌BL21,成功诱导纯化了PpCYP707A1和PpCYP707A2蛋白,SDS-PAGE电泳结果表明,表达蛋白与预期蛋白大小一致。