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目的通过观察转化生长因子β1(TGF-β1)对支气管哮喘患者肺成纤维细胞增殖和分泌的影响,探讨二者在支气管哮喘气道重塑中的作用和关系。方法采用组织块贴壁法和酶消化法,分离和原代培养支气管哮喘患者肺成纤维细胞,免疫荧光法进行鉴定。Oμg/L TGF-β1浓度(对照组)、1μg/L TGF-β1浓度(A组)、TGF-β1浓度(B组)、10μg/LTGF-β1浓度(C组)分别作用肺成纤维细胞48h, MTT法测定成纤维细胞增殖水平,Westrn blot检测a-SMA蛋白的表达,RT-PCR法分别测定在以上不同TGF-β1浓度作用48h下,肺成纤维细胞Ⅰ型胶原(Collagen)和Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)的mRNA表达水平。结果组织块贴壁法成功地培养出了肺成纤维细胞,酶消化法未能成功。组织块接种第6d时有少量细胞于其周围爬出,呈长梭形或者三角形,约25d细胞铺满瓶底,用自然纯化和差速贴壁法纯化细胞,胰酶消化法传代培养,并且可以进行冻存与复苏。免疫荧光法鉴定原代培养出的细胞,成纤维细胞因表达波形蛋白而染成绿色,证明该实验研究的细胞为肺成纤维细胞。MTT法检测结果示：不同浓度的TGF-β1,均可刺激哮喘患者肺成纤维细胞增殖,呈浓度依赖性(P<0.05)。Weternblot结果显示：不同浓度的TGF-β1作用下,成纤维细胞可表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),其表达水平与TGF-β1呈明显的浓度依赖关系(P<0.05)。RT-PCR法检测结果示：在不同浓度的TGF-β1诱导下,成纤维细胞Collagen Ⅰ mRNA和CollagenⅢ mRNA的表达水平表达上调,均随着TGF-β1的浓度增高而增高,呈浓度依赖性(P<0.05)。结论组织块贴壁法是一种较为可靠的肺成纤维细胞分离和原代培养方法。在支气管哮喘发病机制中,TGF-β1可促进肺成纤维细胞的增殖,诱导其向肌成纤维细胞转化而被激活,合成和分泌Collagen Ⅰ和CollagenⅢ,从而引起支气管哮喘患者气道粘膜下纤维化,胶原沉积,由此导致了支气管哮喘患者的气道重塑。