迁移体发现及其超微结构研究

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在细胞定向迁移过程中细胞尾部产生收缩丝,收缩丝末端或交叉部位产生的单层膜囊泡结构,被称为迁移体。当细胞迁移离开后,迁移体还留在原地、破裂或被其它细胞吞噬。因此迁移体是细胞之间内容物传递的途径,可能在调节细胞内稳态、细胞存活、分化、代谢等生理过程以及癌症、传染病发生等病理过程中起着一定的作用。本文首次通过电子显微镜技术研究迁移体的超微结构,旨在为迁移体的发生及相关分子机制研究提供重要的形态学依据。在本文的工作中,我们首先在透射电镜(TEM)下发现迁移体呈石榴样结构,直径可达3μm,内部含有直径50-100 nm的小囊泡。小囊泡的数量相差甚大,多达300个,多数情况少于10个。TEM和扫描电镜(SEM)的观察结果显示迁移体通过收缩丝与细胞胞体连接在一起。利用电子断层成像技术解析了富含囊泡迁移体的部分三维结构,三维渲染结果显示迁移体内囊泡与迁移体外膜融未发生融合。TEM下对细胞分离组分的形态结构进行观察,通过与细胞外迁移体超微结构对比,发现纯化迁移体富集的组分,为迁移体相关蛋白的筛选提供前提。本文利用光镜与电镜关联技术,验证了TSPN4富集的环状结构与电镜下迁移体的位置对应关系,从而确定TSPAN4定位在迁移体上。本文还通过高压冷冻固定技术,发现收缩丝内含有微丝和微管。本研究利用活细胞观察发现多种不同类型体外培养的细胞可以产生迁移体,TEM观察显示大鼠、小鼠、斑马鱼胚胎、鸡胚的组织中存在迁移体样结构。此外,DSS诱导炎症模型中也有迁移体样结构,并利用聚焦离子束扫描电镜对T细胞周围的结构进行三维重构。
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