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烟粉虱Bemisia tabaci Gennidius属同翅目Homoptrea粉虱科Aleyrodidae,是一种危害严重的昆虫。它刺吸植物汁液,造成营养缺失,分泌蜜露,影响光合作用,传播植物病毒,造成巨大经济损失。目前,烟粉虱已经对大多数化学农药产生抗性,同时农药残留带来的环境问题不容忽视。生物防治因其自身的优点成为未来烟粉虱持续控制的发展方向。以菌治虫是生物防治的一个重要方面。玫烟色棒束孢(Isaria fumosorosea)是一种全球分布的常见昆虫病原真菌。本论文研究了一株高致病力的玫烟色棒束孢IF-1106菌株的生物学特性及其对烟粉虱的致病力、侵染过程、侵染后对烟粉虱生理生化指标的影响,进一步评价了该菌株的安全性,为今后利用该菌株进行烟粉虱生物防治提供科学理论依据。主要研究结果如下:1.玫烟色棒束孢的生物学特性玫烟色棒束孢IF-1106菌株分别采用固体培养和液体培养。固体培养采用平皿法,测量菌落直径和产孢量;液体培养采用摇瓶培养,测量菌丝生物量和产孢量。玫烟色棒束孢IF-1106菌株固体培养最适条件是PDA培养基,菌丝生长最适温度为30℃,产孢最适温度为25℃,最适pH为7,全光照条件适合菌丝生长,全黑暗条件适合产孢,不封口培养菌丝生长快、产孢多。液体培养最适碳源和氮源为蔗糖和蛋白胨,当其含量分别为4%和0.5%时最适产孢,在20℃到30℃范围内,该菌均可产生菌丝和孢子,最适温度为25℃,全光照适合菌丝生长,全黑暗适合产孢,当转速为150 r/min、接种量为15%时产孢量最大。玫烟色棒束孢孢子萌发的最适温度为26℃左右,适温为23-32℃,玫烟色棒束孢分生孢子萌发对湿度的要求较高,低于75%分生孢子不萌发。黑暗促进孢子萌发,光照抑制孢子萌发,但光暗交替时随着光照时间的延长孢子萌发率升高。孢子萌发最适pH为5-7,用0.05-0.1%的吐温-80配制孢子悬浮液。经过50℃高温和紫外线照射处理后,玫烟色棒束孢孢子的萌发都受到很大程度的抑制。2.玫烟色棒束孢对烟粉虱的致病力在室内条件下,测定了玫烟色棒束孢IF-1106菌株对烟粉虱的致病力。结果表明,玫烟色棒束孢孢子悬浮液可侵染烟粉虱的各个虫态,其中烟粉虱2龄若虫对玫烟色棒束孢最敏感,处理7d后烟粉虱的累计校正死亡率达83.05%。不同浓度(1.0×107、5.0×106、1.0×106、5.0×105和1.0×105孢子/m1)的玫烟色棒束孢孢子悬浮液处理烟粉虱2龄若虫后,随着浓度的增加,烟粉虱的死亡率从60.60%增加到83.05%,致死中时LT50值从5.86d减小到4.47 d。随着处理时间的延长,致死中浓度LC50值减小,第7d的LC50值为2.61×104孢子/m1。对不同温度(20、23、26、29、32℃)、不同湿度(53%、65%、75%、85%、95%)下玫烟色棒束孢IF-1106菌株对烟粉虱的致病力进行了测定。结果表明:26℃时,烟粉虱2龄若虫的累计死亡率最高。随着相对湿度增大,病菌的致病力增强,当相对湿度为53-95%时,烟粉虱2龄若虫累计死亡率从54.55%增加到88.89%。玫烟色棒束孢IF-1106菌株侵染烟粉虱的最佳条件是温度26℃和相对湿度大于85%。通过测定黄瓜、茄子、番茄和豆角4种寄主植物上不同浓度(1.0×107、5.0×106、1.0×106、5.0×105和1.0×105孢子/m1)的玫烟色棒束孢孢子悬浮液对烟粉虱的的致病力,评价寄主植物对玫烟色棒束孢致病力的影响。烟粉虱的累计校正死亡率分析结果表明:同种昆虫病原真菌在不同寄主植物上对同种害虫的致病力有时也会表现出差异。在同一浓度,相同处理时间下,4种寄主植物上烟粉虱的累计校正死亡率的有所差异,茄子上的LT50值最小,番茄的最大。比较LC50值,豆角上的最小,番茄上的最大,说明在茄子和豆角上的应用效果比在黄瓜和番茄上好。3.玫烟色棒束孢对烟粉虱的侵染过程及生理变化通过扫描电镜观察发现玫烟色棒束孢的分生孢子在烟粉虱若虫表皮表面附着6 h,孢子已出现突起,24 h时分生孢子大多已萌发,并形成芽管和附着胞,并紧紧附着于寄主表皮生长。随着时间延长,到48 h时,芽管继续在表皮上伸长生长,菌丝开始穿透寄主表皮。接种72 h后,有的菌丝已从寄主体内穿出,并形成分生孢子梗,开始产生新的孢子和菌丝,接种120 h后,菌丝大量产生,并形成网状结构,最后整个若虫都被菌丝包围。玻片观察附着在体表的分生孢子萌发后产生芽管,芽管向表皮内部生长,穿透表皮后逐步形成菌丝体进入血腔内,然后在血腔内大量繁殖,随着处理时间的延长,粉虱血腔内的菌丝体越来越多,破坏寄主的组织,消耗寄主体内的营养物质,整个虫体被菌丝段充满,再从体内长出。对玫烟色棒束孢侵染烟粉虱成虫和3龄若虫后,烟粉虱体内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)和羧酸酯酶(CarE)活力进行测定。结果表明,玫烟色棒束孢侵染烟粉虱后,烟粉虱体内SOD、POD、CAT、GSTs和CarE活力都受到明显影响。SOD、POD、CAT、 GSTs和CarE活力在感病前期均有上升趋势,且高于对照,在接菌48-60 h时酶活力达到最大,然后酶活力开始下降,至84 h时均显著低于对照。可见玫烟色棒束孢的侵染严重干扰了烟粉虱正常的生理活动。4.玫烟色棒束孢的安全性按照《农药登记毒理学试验方法》(GB15670-1995)对玫烟色棒束孢菌粉进行急性经口、经皮、吸入毒性试验,眼刺激试验和致敏(皮肤变态反应)试验。结果表明该受试物对雌雄大鼠急性经口LD50>5000 mg·kg-1;急性经皮LD50 (4h)>2000 mg·kg-1;雌雄大鼠急性经皮LC50 (2h)>2000mg·m-3;对试验兔眼平均刺激指数为0;试验兔皮肤斑贴部位未出现红斑、水肿,致敏率为0%。因此,玫烟色棒束孢的急性经口毒性为微毒性,急性经皮及急性吸入毒性均属低毒性,对实验兔皮肤及眼无刺激性;致敏实验属Ⅰ级弱致敏物。综上所述,玫烟色棒束孢是一种安全、高效的防治烟粉虱的生防作用物。已明确其最佳培养方式及作用于烟粉虱的最适条件,初步了解了其对烟粉虱的侵染过程,对其致病机理,还有待进一步深入研究。