儿童急性白血病Notch1、Jagged1基因和蛋白表达及临床意义

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目的通过应用RT-PCR与免疫细胞化学(ICC)技术检测急性白血病(AL)儿童骨髓(MB)或外周血(BP)细胞中Notch相关分子mRNA及Notch1蛋白的表达情况,探讨Notch信号通路在儿童各型急性白血病发生中的致病机制,为儿童AL的靶向治疗提供新的理论依据。方法第一部分通过应用RT-PCR技术检测AL儿童MB或BP单个核细胞中Notch信号的Notch1受体与Jagged1配体以及内参照β-肌动蛋白(β-actin)的mRNA的表达。47例初诊急性白血病儿童(其中B-ALL26例,T-ALL6例和AML15例)和同期非恶性血液病BM标本5例;门诊体检正常儿童PB标本15例,评价Notch1和Jagged1基因阳性表达率;通过Notch1基因=Notch1基因表达/β-actin表达和Jagged1基因=Jagged1基因表达/β-actin表达,计算检测基因的表达水平。第二部分通过应用免疫细胞化学(ICC)技术检测急性白血病儿童骨髓涂片细胞中Notch1蛋白表达。42例初诊急性白血病儿童(其中B-ALL25例,T-ALL7例和AML10例)骨髓涂片和同期非恶性血液病BM涂片标本22例作为对照,每例高倍镜视野下随机计数100个细胞,从Notch1蛋白阳性表达细胞数和细胞着色程度进行分析。结果第一部分Notch1基因的阳性率:ALL及AML组显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);ALL组与AML组比较(P>0.05),其差异无统计学意义。Notch1基因的表达水平:ALL组及AML组和对照组比较,ALL组与AML初发组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。T-ALL组与B-ALL Notch1基因阳性率差异无统计学意义(P>0.05);但是,两组Notch1基因表达水平差异有统计学意义(t=3.835,P=0.001)。Jagged1基因的阳性率:ALL组与对照组比较(P>0.05)、AML组与对照组比较及ALL组与AML组比较(P>0.05)差异均无统计学意义。Jagged1基因的表达水平:ALL组及AML组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。ALL组与AML组比较,其差异无统计学意义(P>0.05)。T-ALL组与B-ALL在基因表达阳性率及基因表达水平两方面差异无统计学意义(P>0.05)。发病初期同时收集BM及PB的12例AL患儿,进行BM和PB中基因表达水平的半定量比较,发现Notch1基因、Jagged1基因在BM及PB中表达一致,经统计分析,其差异无统计学意义(P>0.05)。第二部分Notch1受体蛋白的阳性细胞表达率:T-ALL组及AML组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),B-ALL与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),ALL组与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。T-ALL患儿和B-ALL患儿进行比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Notch1蛋白的阳性细胞表达率依照ALL-LR、ALL-MR、ALL-HR的次序升高,HR组高于LR组及MR组,但组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论1.在不同类型儿童ALL中,Notch1的表达有明显差异,T-ALL患儿中的Notch1表达明显高于B-ALL。2.Notch1在儿童AML异常表达,提示Notch1可能在儿童AML中起着重要作用。3.Jagged1在ALL及AML患儿中异常表达,Jagged1可能在儿童AL中也起着重要作用。4.骨髓及外周血中Notch1mRNA、Jagged1mRNA表达水平一致,可用外周血替代骨髓进行Notch1、Jagged1基因mRNA检测。5.Notch1的mRNA及蛋白表达异常对于儿童急性白血病免疫分型有一定指导意义。
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