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肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand, TRAIL)是TNF家族成员中的一员,TRAIL分子能够特异性地诱导多种组织来源的肿瘤细胞凋亡,而不影响正常组织和细胞的功能,因而具有较好的临床应用前景。 应用TRAIL进行肿瘤的基因治疗可以说是一个很有潜力的途径。因为体外实验发现,携带TRAIL基因的腺病毒转染的肿瘤细胞不但可以诱导其自身的凋亡,还可以通过旁路效应诱导未转染的肿瘤细胞的死亡。 一些实验提示内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cell, EPC)在体内能定向归巢于肿瘤,参与肿瘤新生血管的建立。利用这一点,将EPC偶联抑制血管发生因子或其它抗肿瘤药物或转染抑癌基因可抑制肿瘤的生长,可能是治疗肿瘤的有效方法。 本文分以下几个步骤进行研究: 1.TRAIL对卵巢癌细胞的促凋亡作用 目的 分析重组人TRAIL蛋白诱导卵巢癌细胞3AO的凋亡作用。方法MTT法观察不同浓度人可溶性TRAIL对卵巢癌细胞3AO的直接细胞毒作用,ANNEXIN V-FITC染色流式细胞仪检测凋亡率。结果25～100 ng/ml的重组人TRAIL蛋白可诱导卵巢癌细胞3AO发生凋亡,且随着浓度增高,凋亡率呈上升趋势。结论 重组人TRAIL蛋白可诱导卵巢癌细胞3AO的凋亡,凋亡率与TRAIL蛋白的浓度呈正相关。 2.脐血EPC的分离、培养及鉴定 目的 研究脐血中EPC的分离方法、培养扩增条件及鉴定其表面标志。为进一步对卵巢癌的基因治疗提供足够数量的载体。方法 用CD133+分离试剂盒从脐血中分离CD133+细胞,在体外诱导扩增16天后,通过免疫组化ABC染色、荧光显微镜、电镜、流式细胞仪检测鉴定细胞性质。结果 从脐血中分离的CD133+细胞可诱导出EPC,表现为表达内皮细胞标志,并最终能分化为成熟内皮细胞形成管腔样结构。结论脐血CD133+细胞能诱导出EPC,在体外培养能分化为成熟内皮细胞。