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目的探讨应用表面增强激光解离飞行时间质谱技术(surface-enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry, SELDI-TOF-MS)测试不同剂量叶酸(folic acid,FA)作用下缺氧胎鼠神经干细胞(Neural stem cells,NSCs)的蛋白质表达谱,从中筛选出差异表达蛋白,明确叶酸对其相关作用通路的保护机制。方法原代培养胎鼠神经干细胞,获得NSCs并分为5组：①正常对照组(Control)叶酸浓度为4μg/ml;②缺氧模型组(Hypoxia)叶酸浓度为4μg/ml；③缺氧叶酸低剂量组(Hypoxia+Folate-L)叶酸浓度为8μg/ml;④缺氧叶酸高剂量组(Hypoxia+Folate-H)叶酸浓度为44μg/ml;⑤缺氧叶酸缺乏组(Hypoxia+Folate-D)叶酸剂量为0.65μg/ml;于增殖第3d将除正常对照组外的其他4组细胞进行缺氧培养,8h后取出,继续培养至第7d收集增殖期细胞：细胞形态学观察；用台盼蓝染色计数缺氧损伤后的各组细胞密度；MTT法检测叶酸对细胞增殖状态的影响；采用弱阳离子交换芯片(WCX-2)蛋白芯片检测不同叶酸剂量下胎鼠NSCs蛋白表达差异；结果采用Biomarker Wizard软件进行分析,通过查询蛋白库,对特定分子质量所对应的标记蛋白进行初步确定；采用流式细胞术检测各组的凋亡率及细胞周期；采用Western blot方法检测各组NSCs MAPK信号通路相关蛋白(pERK1/2、pJNK1/2、P38)表达。结果经37℃,5%CO2、1%O2、94%N2条件缺氧8h后,NSCs形态及计数上都显示出损伤迹象,成功建立体外胎鼠NSCs缺氧损伤模型。MTT结果显示：每组隔天之间MTT值均有差别(P<0.05)。除24h时间点外,经SNK-q检验得出叶酸不同剂量组与对照组相比均有差别(P<0.05),除Hypoxia+Folate-D组随时间MTTOD值呈下降趋势以外,其余四组随时间MTTOD值均呈上升趋势,之后有所下降。台盼蓝染色计数活细胞密度结果显示,Hypoxia组与其余四组差异有统计学意义(P<0.05), Hypoxia+Folate-H组最高、Hypoxia+Folate-D组最低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术(Flow cytometry, FCM)检测结果显示：Hvpoxia+Folate-L组的细胞凋亡率最低,Hvpoxia+Folate-D组凋亡率最高。细胞周期检测结果提示Hypoxia+Folate-H组的S期较活跃,Hypoxia+Folate-D组和Hypoxia组相较不活跃。蛋白芯片结果提示：叶酸补充可促进NSCs增殖；每组芯片上均捕获到81种蛋白质点,筛选出不同叶酸剂量组与Control组之间的差异蛋白共34种,其中有5个蛋白存在显著性差异(P<0.05)。初步推断这些蛋白与NSCs凋亡相关,且在不同叶酸剂量组图谱表达不同。Western blot结果显示,各组NSCs pERKl/2蛋白表达量与Control组相比差异均具有统计学意义(P<0.05),其中Hypoxia+Folate-H组表达量最高(P<0.05),Hypoxia+Folate-D组最低(P<0.05)。除与Control组和Hypoxia+Folate-L组差异无统计学意义外(P>0.05),其余各组NSCs pJNK1/2蛋白表达差异均具有统计学意义(P<0.05), Hypoxia+Folate-D组表达量最高(P<0.05),Hypoxia+Folate-H组最低(P<0.05)。Hypoxia+Folate-D与Control、Hypoxia+Folate-L、Hypoxia+Folate-H组NSCs P38蛋白表达差异具有统计学意义(P<0.05)。结论本实验成功建立体外胎鼠NSCs缺氧模型,研究结果显示叶酸可以促进缺氧损伤的NSCs增殖,抑制或减缓细胞凋亡。叶酸可促进体外缺氧胎鼠NSCs内ERK蛋白表达同时抑制JNK、P38蛋白的表达,减少缺氧对体外胎鼠NSCs凋亡；在细胞周期的研究中提示叶酸可能对NSCs的蛋白合成及DNA酶的合成具有保护作用。