研究背景与目的：妊娠期糖尿病（Gestational Diabetes Mellitus，GDM）是指妊娠期特发的糖代谢异常性内分泌疾病，是妊娠期常见的并发症之一。GDM发病率逐年增高，已影响了全球3-5%的妊娠期妇女，对孕妇及胎儿的健康造成了严重的威胁。瘦素是调节能量和脂肪代谢的重要因子，胰岛素是糖脂代谢的关键物质。国内、外多项研究表明，瘦素与胰岛素存在双向调节作用，GDM时这种调节作用失衡，出现高瘦素血症及高胰岛素血症。过高水平的胰岛素不能对甘油三酯（TG）的合成与分解代谢发挥正常的生理作用,从而导致GDM患者血中的TG水平异常升高。然而，这不能合理解释经过饮食及胰岛素治疗后血糖得到良好控制的GDM孕妇，TG仍有显著改变的现象，说明可能有其他的原因导致了GDM孕妇的脂质代谢异常。脂蛋白脂酶（LPL）、肝脂酶（HL）是调节脂类代谢的关键酶，分别催化乳糜微粒（CM）、极低密度脂蛋白（VLDL）和高密度脂蛋白（HDL）内核的甘油三脂（TG）水解。已有研究表明，LPL、HL含量或活性降低可使脂质清除能力下降，导致TG的升高及代谢紊乱。目前，对瘦素与LPL、HL之间的相关性、是否与GDM的脂代谢紊乱发生、发展有关，国内外研究尚未提出此观点。本课题通过细胞培养及动物模型研究瘦素与LPL、HL及脂代谢的相关性，以及高浓度瘦素是否通过改变LPL、HL的活性来改善脂代谢紊乱，对GDM的病理生理机制及可能的治疗新方法作初步的探索。方法：一、细胞实验：用1×10-6mol/L的胰岛素处理LO2细胞48小时，构建胰岛素抵抗（InsulinResistance，IR）的肝细胞模型（LO2-I）；采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法（GOD-POD）进行细胞模型鉴定。收集LO2细胞和LO2-I细胞，采用RT-PCR和WB检测细胞内LPL、HL mRNA和蛋白质相对表达量，用油红染色法观测细胞内脂肪含量。分别于两组细胞中加入含有0，50，100，250μg/L瘦素（Leptin）培养24小时，检测LPL和HLmRNA和蛋白质含量，及细胞内脂肪的堆积情况。将浓度为100μg/L瘦素培养下的LO2-I细胞分三组进行培养，一组加入单纯培养基，一组加入仅含有100μg/L瘦素的培养基，一组加入含有100μg/L瘦素及2μmol/L瘦素拮抗剂（Leptin-A）的培养基，分别培养24小时，并检测三组LPL和HLmRNA和蛋白质表达量，及细胞内脂肪的堆积情况，以了解瘦素对体外培养肝细胞脂代谢的影响。二、动物实验：将C57BL/KSJ野生型（Lepr+/+）（A组）、杂合型（Lepr db/+）（B组）雌鼠分别与野生型Lepr+/+雄鼠合笼；眼眶采血，离心法收集血清；ELISA检测A组，B组小鼠非孕期以及孕期血清瘦素、胰岛素、LPL、HL、TG、FFA的含量；酶活力检测试剂盒检测LPL和HL酶活力。妊娠前后分别向两组小鼠体内注射5mg/kg·day的瘦素，隔日搜集血清，检测LPL、HL酶含量和活性，以了解瘦素对Lepr+/+和Lepr db/+小鼠脂代谢的影响。结果：一、细胞实验结果：1、经胰岛素处理的LO2—I细胞糖耐量显著低于LO2细胞，表明IR形成，细胞模型建立成功。2、LO2—I细胞LPL、HL mRNA和蛋白质相对表达量显著低于正常LO2细胞，且细胞中油红O油脂染色明显增高。3、不同浓度瘦素处理后，LO2-I细胞内LPL、HL mRNA及蛋白的表达水平有所增高，细胞内脂肪堆积量不同程度减少，尤其以100μg/L瘦素浓度下效果最为明显。4、瘦素+瘦素拮抗剂组LPL、HLmRNA及蛋白的表达及脂肪含量无明显增加。二、动物实验结果：1、Lepr db/+小鼠（GDM小鼠）非孕期及孕期的血清瘦素浓度均高于Lepr+/+小鼠（正常小鼠），但Lepr db/+小鼠仅在孕期出现糖尿病表现：血胰岛素升高和葡萄糖耐受降低， TG明显升高，LPL、HL单位酶活力均显著降低；2、向两组非孕期和孕期小鼠体内分别注射5mg/kg·day的瘦素后，LPL、HL的酶活力均有所增加，非孕期GDM鼠与正常鼠无明显差异，但GDM鼠孕期注射瘦素以后，LPL、HL酶活力的增加不及正常鼠（P<0.01）。结论：1.在胰岛素抵抗的肝细胞中，LPL、HL活性降低，脂肪分解减少，细胞内脂肪堆积；2.一定浓度的瘦素可增加胰岛素抵抗肝细胞中LPL、HL的表达，降低细胞内油脂堆积；3. GDM小鼠孕期LPL、HL活性降低，脂肪分解减少，引起脂代谢紊乱。4.瘦素可增加GDM小鼠孕期LPL和HL的活性，改善脂代谢紊乱，为GDM的治疗提供了新的思路。