【摘 要】
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Doramectin是由除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)—株突变株HCB10042产生的一种大环内酯类抗生素,为avermectin的结构类似物,即C25-环己烷阿维菌素B1。为了获得doramectin的
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Doramectin是由除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)—株突变株HCB10042产生的一种大环内酯类抗生素,为avermectin的结构类似物,即C25-环己烷阿维菌素B1。为了获得doramectin的优良产生株,采用了三种筛选模型:Rhodamine B筛选,前体耐受筛选和氨基糖苷类抗生素抗性筛选;采用了几种诱变方法:紫外诱变,NTG诱变,60Co诱变,以及它们的联合诱变。利用这些方法选育出多株产抗单位比出发菌株提高50倍以上的doramectin产生菌。 阿维菌素生物合成基因簇中存在一个aveD基因,其功能是编码C5-O-甲基转移酶,此酶的作用是催化高活性组分B向低活性组分A的转变。因此,可以通过基因操作将doramectin产生茵中染色体DNA上的aveD基因进行破坏,使其丧失活性,阻断组分B向组分A的转换,从而得到只产生单一组分B的工程菌。本论文的研究完成了aveD基因的扩增和测序,构建了用于与染色体DNA同源重组的质粒pLY34,这一质粒含有一段破坏了的aveD序列。同时比较了原生质体转化,电转化,接合转移等外源基因导入方法。并通过接合转移的方法得到pLY34的转化子菌株。
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