基于有机小分子纳米材料的电化学发光免疫传感器对黄曲霉毒素B1的检测应用研究

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近年来,随着经济的快速发展,大家对食品中霉菌毒素的检测更加关注。黄曲霉毒素B1(AFB1)作为最常见的一种霉菌毒素,每年因其产生的食品安全事故为我国甚至世界带来重大经济损失。因此,快速准确灵敏检测AFB1至关重要。本论文基于有机小分子ECL纳米发光体的优异光学性质,结合信号放大策略构建了系列高灵敏电致化学发光免疫传感器用于AFB1的快速检测。具体研究内容如下:1.通过重沉淀法制备9,10-二联苯蒽立方纳米粒子,其表现出优秀的聚集诱导电致化学发光特性,将其修饰于电极表面,并通过聚乙烯亚胺引入氨基功能化。随着戊二醛、抗体和牛血清白蛋白依次组装后,构建的无标记免疫传感器通过AFB1对光发射体ECL信号的直接淬灭进行检测,随着靶标浓度的增加,ECL信号下降。提出的免疫传感器在检测过程中显示了高灵敏度和低检测限。2.构建了一种比率竞争型免疫传感器用于AFB1检测,相比第一部分有效排除了外界干扰,获得了更好的稳定性。首先制备新型钨金属有机骨架,并将其用于负载二茂铁甲醛作为电化学信号指示剂,以此复合碳纳米管获得具良好导电性及大比表面积的复合基底材料MWCNTs/Fc-MOF,用于捕获大量抗体的同时,作为内部参考信号用于系统自矫正;其次,制备了纳米棒ECL发射体BPYHBF,将其作为探针标记竞争抗原BSA-AFB1。最终,基于竞争免疫反应,构建的传感器产生的ECL信号随靶标浓度的增加而降低,而在0.45 V处产生的电化学信号不随靶标浓度的变化而变化。因此,通过信号ECLBPYHBF/DPVMWCNTs/Fc-MOF实现对AFB1的检测。所制备的传感器表现出优异的稳定性,可接受的灵敏度和准确性。3.构建一种检测AFB1的新型差分竞争型免疫传感器,相比第二部分的两种信号输出模式,此构建的传感器可分别在阴、阳极产生两个独立ECL信号。简化了检测操作的同时,单一信号输出也可实现系统自矫正,避免了两种信号输出带来的外界干扰。首先,制备了用于捕获抗体的三维多孔碳材料和具电位分辨ECL特性的聚合纳米棒发射体IBPHF,在TPA/K2S2O8存在下,发射体在1.5 V和-1.5 V左右分别发射出最强ECL信号(ECLanode和ECLcathode),然后将其用于标记BSA-AFB1。在AFB1存在下,该竞争型免疫传感器的ECLanode和ECLcathode均随AFB1的增加而减少。最后通过ECLanode和ECLcathode的差值(△ECL)检测靶标,所用的差分策略可有效消除假信号,实现系统自矫正,完成了对AFB1的可靠检测。综上所述,制备的免疫传感器实现了对靶标的灵敏快速检测,并在实际样品中获得了令人满意的准确度,最终,所提出的策略对其他霉菌毒素的检测提供了思路。
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