【摘 要】
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为了构建疫苗级显性标记载体,该研究利用乳链菌肽（Nisin,一种由某些乳球菌产生的高效、无毒的天然食品防腐剂）作为选择压力,以乳链菌肽抗性作为显性选择标记来构建乳球菌疫苗级
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为了构建疫苗级显性标记载体,该研究利用乳链菌肽（Nisin,一种由某些乳球菌产生的高效、无毒的天然食品防腐剂）作为选择压力,以乳链菌肽抗性作为显性选择标记来构建乳球菌疫苗级表达载体,来弥补现有载体的不足.同时,组建基因工程乳球菌,为重组乳球菌表达外源基因的研究奠定基础.利用乳链菌肽抗性菌株中乳链菌肽抗性和乳糖发酵（NisLac<+>）紧密连锁的原理,在含有乳链菌肽、乳糖和溴甲酚紫的选择培养基上,从新鲜的205份牛奶样品中定向筛选乳链菌肽抗性菌株.以柔嫩艾美耳球虫TA4抗原基因为例来检测所构建表达载体的性质.根据已发表的球虫TA4基因序列设计特异性引物,并在引物的两端分别加上Kpn I和Sac I作为插入的酶切位点,将TA4基因克隆到表达载体pMG36n中,电穿孔法转化乳酸乳球菌,获得有TA4抗原活性的乳酸乳球菌工程菌,对该菌的表达产物用SDS-PAGE检测,结果表明表达产物的蛋白分子量为25KDa,与预期结果相同.以刚出壳的健康雏鸡为试验对象,用上述表达球虫TA4基因的工程乳球菌口服雏鸡10天,之后进行人工感染球虫试验,一周后宰杀,通过试验鸡体重、粪便中卵囊数、盲肠病变记分、盲肠卵囊数和抗球虫指数等指标进行评价,结果抗球虫指数为160.12,达到良好水平.
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