丙型肝炎病毒（HCV）是非甲非乙型肝炎的主要病原因子。HCV急性感染后约75％转化为慢性肝炎，其中25-30％最终结局为肝硬化，肝细胞肿瘤和肝功能衰竭。世界范围内约有1.7亿HCV感染者，我国大约占5000万。因此HCV感染及引起的相关疾病已经成为严重危害人类健康的社会公共卫生问题之一。目前尚无特异有效的预防和治疗方法。 HCV为有囊膜的单股正链RNA病毒，属黄病毒科肝炎病毒属。HCV基因组全长约9.6kb，含有一个单独开放读码框，两侧为与复制和翻译相关的非编码区。HCV ns5b基因编码的NS5B蛋白，具有RNA依赖的RNA聚合酶活性（RdRp），是基因组复制的关键酶。出于NS5B蛋白在HCV基因组复制中的重要作用和宿主细胞中缺乏具有类似功能的相应酶类，NS5B蛋白是抗HCV研究中的理想靶位。 RNAi（RNA interference）是双链RNA介导的、序列特异的同源基因转录后的沉默效应。自1998年Fire等在研究线虫时首次发现以来，相继在果蝇、涡虫、锥虫、小鼠及哺乳动物细胞中发现RNAi现象。一般认为：RNAi 第四军医大学硕士学位论文效应作用机制是SIRNAskmall interfering uA duplex)作为中介分于，引导RISC（RNAi inducing suppress complex）至靶基因 m洲A处，随后核酸内切酶将之降解。目前RNAi的研究己经取得了很大进展，必将成为基因功能、特异基因治疗和抗病毒研究的一种有力工具。 本研究首先从HCV基因组中扩增出nssb基因，构建了nssb基因与报告分子EGFP（增强型绿色荧光蛋白）基因的融合基因真核表达质粒pEGFPN30；通过含有不同G418浓度梯度的培养液培养HepGZ细胞，确定了筛选用 G4181作浓度为 800pg／ml；利用脂质体法将该重组质粒转染 HepGZ细胞，经过有限稀释法和 G4压力选择，应用荧光显微镜和 RTPCR检测，获得可稳定表达NSSBEGFP融合蛋白的HepGZ细胞克隆。然后根据dsRNA设计原则，结合nssb基因的序列特征，借助生物信息学软件设计了针对nssb基因的siRNAs，并交由公司化学合成；电穿孔法转染上述稳定转染的细胞克隆，同时分别以非特异的SIRNAS转染组和空白转染组为对照，DAPI染色后通过荧光显微镜和内标化RTPCR检测，初步证实了化学合成的SIRNAS可以特异阻断nssb基因的表达。本研究为进一步利用RNAi抗HCV感染研究奠定了基础。