【摘 要】
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鸡球虫病（Coccidiosis）是一种在世界范围内严重危害养鸡业发展和降低经济效益的原虫病。它可以导致鸡采食量减少、精神沉郁,甚至死亡。为了减少鸡球虫病的发生,疫苗得到广泛使用,其中弱毒苗成为应用最广泛的球虫疫苗,其致弱方法主要分为早熟选育法、鸡胚传代法和理化致弱法。本试验选用理化致弱方法对鸡柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）进行紫外线（Ultraviolet,UV）辐射致弱,使之达到减毒效果
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鸡球虫病（Coccidiosis）是一种在世界范围内严重危害养鸡业发展和降低经济效益的原虫病。它可以导致鸡采食量减少、精神沉郁,甚至死亡。为了减少鸡球虫病的发生,疫苗得到广泛使用,其中弱毒苗成为应用最广泛的球虫疫苗,其致弱方法主要分为早熟选育法、鸡胚传代法和理化致弱法。本试验选用理化致弱方法对鸡柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）进行紫外线（Ultraviolet,UV）辐射致弱,使之达到减毒效果。试验结果如下:1.鸡球虫卵囊分离与鉴定。对实验室现保存的E.tenella进行复壮增殖,分离纯化得到高纯度的E.tenella,通过形态学和分子生物学进行虫种鉴定,结果显示所扩增的ITS-1基因大小为551bp,与预期结果相一致;通过同源性分析比对发现,其与Gen Bank报道E.tenella（GQ856310.1）同源性高达99.47%。2.开展紫外辐照鸡球虫卵囊试验。将高纯度的E.tenella在UV波长为365 nm以不同时间辐射,观察辐射卵囊的相对孢子化率情况。结果表明:短时间的UV辐射对卵囊活力影响不明显,但随着辐射时间延长,卵囊的相对孢子化率明显下降,其时间应控制在30～40 min为宜。其次,分别选用2.5%K2Cr2O7、PBS溶液和50%甘油生理盐水作为E.tenella的保护溶液,置于UV下辐射,其中PBS保护溶液球虫卵囊发育效果最好,相对孢子化率可达70.03%。结合前面结果,将E.tenella置于最佳辐射时间和最适溶液中,对其进行不同强度的UV辐射,发现随着辐射强度的增强,卵囊相对孢子化率随之下降,且辐射强度在1174 uw/cm~2以后,严重影响了卵囊的发育情况,应将辐射强度控制在562 uw/cm~2～785 uw/cm~2较为理想。3.开展UV致弱后的E.tenella致病性研究。UV致弱后的E.tenella接种鸡后,通过测定鸡存活率、相对增重率和盲肠平均病变记分等,判定致弱后的E.tenella卵囊致病力,发现随UV辐射强度的增强,鸡只相对增重率随之升高且与空白对照组差异不显著（P＞0.05）;同理平均病变记分与空白对照组相比无差异性变化（P＞0.05）,说明UV辐射强度越强,致病力越弱,且辐射强度在2140 uw/cm~2时,几乎没有致病力。经UV辐射后的卵囊培养观察,孢子囊清晰可见,卵囊内有四个孢子囊,每个孢子囊内有两个子孢子。采用溴化乙锭染色法对子孢子进行染色,子孢子大部分未着色,说明UV辐射后的E.tenella卵囊成活率较高。4.开展辐照致弱的E.tenella疫苗免疫保护试验。取辐射后的卵囊对3日龄小鸡进行初次免疫,7 d后进行二免,在二免后的第7 d开始接受攻虫实验,通过测定小鸡的相对增重率和卵囊排出数,计算出抗球虫指数（Anti-coccidial index,ACI）;通过免疫组织化学技术,分析肠道损伤情况;通过检测细胞因子表达水平,以评估经疫苗免疫后免疫保护效果。结果显示,免疫攻虫组各项检测指标均高于未免疫攻虫组。其中相比较其他试验组,UV强度为785 uw/cm~2组卵囊减少量明显（P＜0.05）;UV强度为562 uw/cm~2和785 uw/cm~2的两组,各细胞因子的相对表达量明显上升,与其他试验组相比,差异显著（P＜0.05）;ACI指数表明UV在785 uw/cm~2条件下致弱疫苗具有较强的免疫保护性（173.73）,562 uw/cm~2和1174 uw/cm~2次之（163.82和167.35）。综上所述,经紫外线弱毒疫苗具有良好的免疫保护性,尤其562 uw/cm~2和785uw/cm~2致弱组中的免疫效果最佳。
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