孕哺期暴露邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯对仔鼠海马CA1区锥体神经元树突形态发育的影响

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shc200800
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目的:邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(Di(2-ethylhexyl) phthalate,DEHP)是一种用于增加聚氯乙烯塑料的可塑性和耐用性的人工合成化学物,广泛用于建筑业,汽车产品,美容用品,香水,食品包装袋,儿童产品和医疗设备。妇女妊娠期和哺乳期是婴幼儿神经发育的关键窗口期,流行病学研究表明孕妇围生期暴露DEHP会导致儿童大脑功能异常。大脑海马体主要负责记忆和学习,海马CA1区锥体神经元的树突调控神经信号的整合和传导。海马CA1区锥体神经元树突的萎缩会导致认知功能障碍。目前,母体孕期和哺乳期暴露DEHP是否影响仔鼠海马CA1区锥体神经元树突的发育尚不明确,其相关机制也有待研究。本研究通过建立母鼠孕期和哺乳期暴露DEHP的模型,探索孕期和哺乳期暴露DEHP是否会影响仔鼠海马CA1区锥体神经元树突的发育,并探明是否通过JNK1介导MAP2和stathmin的生物水平紊乱的作用机制。  实验方法:将已孕的雌性Wistar大鼠随机分为四组:0 mg/kg/day组、30 mg/kg/day组、300 mg/kg/day组和750 mg/kg/day组,各剂量组以相应的浓度的DEHP玉米油溶液进行灌胃。在仔鼠PN7、PN14和PN21时,取仔鼠大脑Golgi-Cox染色观察海马CA1区树突发育,并用western blot和免疫荧光法检测树突发育相关蛋白表达。  结果:1、通过海马CA1区树突Golgi-Cox染色观察,在PN7、PN14和PN21,与对照组相比,暴露组雄性仔鼠海马CA1区锥体神经元基树突分支总长度和基树突分支与同心圆的交点数显著下降(p<0.05),而暴露组雌性仔鼠没有显著改变(p>0.05);在各时间点,所有性别,所有暴露组和对照组相比,顶树突总长度都没有显著差异(p>0.05);在所有时间点,各个暴露组雄性仔鼠与对照组相比,顶树突分支与同心圆的交点数只在PN7显著下降(p<0.05),各个暴露组雌性仔鼠没有显著性变化。2、通过western blot检测相关蛋白发现在PN7、PN14和PN21时,300mg/kg/day组和750 mg/kg/day组雄性仔鼠海马MAP2、p-MAP2、p-stathmin、p-JNK1蛋白表达与对照组相比显著下降(p<0.05),stathmin蛋白表达显著上升;在各个时间点,与对照组相比,30 mg/kg/day组雄性仔鼠海马MAP2、p-MAP2、p-JNK1蛋白表达降低,但MAP2只在PN7显著下降(p<0.05),p-MAP2只在PN21下降具有显著性改变(p<0.05),p-JNK1在PN14和PN21下降具有显著性(p<0.05),stathmin蛋白表达与对照组相比上升,但在PN7和PN21上升有统计学意义(p<0.05)。对于雌性仔鼠,在各个时间点,各个暴露组海马相关蛋白表达与对照组相比都没有显著性改变。3.通过免疫荧光检测发现,在所有时间点,与对照组比较,各个暴露组雄性仔鼠海马CA1区p-MAP2、p-stathmin表达下降,除30 mg/kg/day组在PN7时p-MAP2、p-stathmin表达下降不显著以外,其余各个时间点,各个暴露组都具有统计学意义;对于雌性仔鼠,在各个时间点,各个暴露组海马CA1区p-MAP2、p-stathmin表达都没有显著性改变。  结论:1、孕期和哺乳期暴露DEHP影响雄性仔鼠海马CA1区锥体细胞树突总长度和树突分支复杂性发育,对雌性后代没有影响。2、暴露DEHP缩短雄性仔鼠CA1区锥体细胞树突总长度并影响分支复杂性,是通过降低海马p-MAP2和p-stathmin蛋白表达水平所导致。
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