毛细管电泳—电化学/电化学发光检测肿瘤细胞中的生物活性物质

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第一章首先对毛细管电泳的基本原理、进展状况进行了简单介绍。重点就毛细管电泳在单细胞方面的做详细分析,其中包括单细胞进样,单细胞溶膜、单细胞检测方法等,并对电化学发光检测技术以及其在毛细管电泳的应用进行了介绍。  第二章本章采用了毛细管电泳-电化学发光检测的方法对Ramos肿瘤细胞中的谷胱甘肽进行了检测,首先对实验装置进行改进。在此基础上考察了缓冲液类型、缓冲液的pH及浓度,发光试剂三联吡啶钌的浓度、分离电压、检测电势、进样电压和时间等,并确定了检测的最佳实验条件为:pH值为8.0,浓度为5.00×10-2mol·L-1的NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液,发光试剂Ru(bpy)32+的浓度为5.00×10-3mol·L-1,设定15 kV的分离电压和15 kV的进样电压,13 s的进样时间,1.2 V(vs.Ag/AgCl)的检测电势;最后检测得到Ramos细胞中谷胱甘肽含量约为22.0-28.0 fmol,得到的线形范围为1.58×10-6~2.0×104mol·L-1,相关系数0.9967,检测限(S/N=3)为6.2×10-7mol·L-1,经过重复测定得到谷胱甘肽的迁移时间tm和发光强度Ⅰ的相对标准偏差(RSD)分别为0.39%和0.33%,回收率为97-103%。  第三章在毛细管电泳统中,结合电化学分析仪对Ramos肿瘤细胞中的抗坏血酸进行了分析;首先对实验条件和仪器设置进行选择,可得最佳实验条件,在的NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液(pH值为7.5、浓度为4.00×10-2mol·L-1)体系中,设定检测电势为1.2 V(vs.Ag/AgCl),进样10 kV×10 s,在15 kV分离电压下分离检测得到单个Ramos细胞中抗坏血酸的含量为9.6-16.5 fmol,经过重复测定得到抗坏血酸的迁移时间tm和和电流值ip的相对标准偏差(RSD)分别为1.01%和3.42%,回收率为98-104%。  第四章采用毛细管电泳-电化学/电化学发光检测体系,同时对含乳饮料中游离的甘氨酸进行定性和定量分析,确定了检测的最佳实验条件为:pH值为8.3、浓度为5.00×10-2mol·L-1的NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液,发光试剂Ru(bpy)32+的浓度为5.00×10-3mol·L-1,进样10 kV×10 s,分离电压为12 kV,检测电势为1.2 V(vs.AR/AgCl);利用电化学/电化学发光方法得到甘氨酸的线形范围分别为7.5×10-6-1.2×10-4mol·L-1和5.0×10-5-3.0×10-4mol·L-1,最低检测限分别(S/N=3)为7.9×10-7mol·L-1和3.7×10-5mol·L-1;根据电化学线性范围和样品曲线可以得到样品中游离甘氨酸的浓度为3.0mol·L-1和3.5mol·L-1,符合添加剂行业国家标准,经过重复测定两种检测方法得到的回收率分别为97~106%和95~102%。
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