RMP对基因组保护作用的研究

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目的:以p53为对照,研究RMP在肝癌细胞HepG2基因组中的保护作用,探讨两者在保护基因组中的关系以及RMP在导致肝癌发生和发展中对基因组保护作用的分子机制。方法:1.以OTM为指标,彗星电泳检测辐照后各组细胞的损伤情况。2.以γH2AX为指标,用免疫荧光法进一步确认辐照后各组细胞的损伤程度。3. Real-time PCR检测不同处理条件下各组细胞的RMP和p53mRNA表达变化情况。4. Western blot检测不同处理条件下各组细胞的RMP和p53蛋白表达变化情况。5. Real-time PCR检测不同处理条件下各组细胞中的ATM、ATR、Chk1、Chk2、DNA-PK、53BP1、Ku70、Mre11、RAD50、GADD45、BRCA1、CDC25等损伤修复相关基因的mRNA表达变化情况。结果:1.彗星电泳检测的结果发现RMP与p53均能降低肝癌细胞HepG2中的DNA损伤程度。2.免疫荧光的结果显示在肝癌细胞HepG2中损伤细胞数占总细胞数的比例无差异,但是在不同实验组的单个细胞中DNA的损伤程度有差异,结果进一步的证实了RMP与p53能降低DNA损伤程度,与彗星电泳结果相符。3. Real-time PCR检测各组细胞RMP与p53在基因水平上的表达,结果发现两者在基因表达水平上不具有相关性。4. Western blot检测各组细胞RMP与p53在蛋白水平上的表达,结果发现两者在蛋白表达水平上不具有相关性。5. Real-time PCR检测各组细胞损伤修复相关基因的表达,结果推测RMP可能是通过RAD50、GADD45、BRCA1、CDC25等相关基因对基因组起保护作用。结论:1.与p53对基因组的保护作用相比较,RMP同样对基因组起着保护作用。2.RMP和p53在基因和蛋白表达量上无直接相关性,提示两者在基因组中的保护作用可能是通过不同的途径而发挥作用。3.RMP可能是通过RAD50、GADD45、BRCA1、CDC25等相关基因对基因组起保护作用。
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