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目的:验证5-氟尿嘧啶(5-FU)可诱导胃癌SGC-7901细胞产生保护性自噬,观察自噬抑制剂巴弗洛霉素A1(Bafilomycin A1)对胃癌SGC-7901细胞自噬水平的影响,初步探讨改变自噬水平对胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭转移能力和对5-FU敏感性的影响。方法:1、分别以含0、0.625、1.25、2.5、5.0、10.0ug/m L 5-FU的RPMI-1640完全培养基(含10%胎牛血清)培养胃癌SGC-7901细胞24、48h,应用MTT法检测5-FU对胃癌SGC-7901细胞细胞增殖能力的影响。2、以含1.25ug/m L5-FU的RPMI-1640完全培养基培养胃癌SGC-7901细胞0、3、6、12、24、48h,应用MTT法检测胃癌SGC-7901细胞细胞增殖能力的变化,应用蛋白质印记法(Western Blot)检测5-FU对胃癌SGC-7901细胞自噬及凋亡蛋白表达的影响。3、将细胞分为4个组:对照组(以不含干预药物的RPMI-1640完全培养基培养)以下简称Cnotrol组;Bafilomycin A1组(以含100n MBafilomycin A1的RPMI-1640完全培养基培养)以下简称BAF组;5-氟尿嘧啶组(以含1.25ug/m L5-FU的RPMI-1640完全培养基培养)以下简称5-FU组和5-氟尿嘧啶+Bafilomycin A1组(以含有100n MBafilomycin A1和1.25ug/m L5-FU的RPMI-1640完全培养基培养)以下简称5+B组。应用扫描电镜、免疫组化及Western Blot法检测细胞自噬水平变化,应用MTT法检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞侵袭转移能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western Blot检测凋亡相关蛋白表达情况。结果:1、5-FU对胃癌SGC-7901细胞的细胞增殖能力抑制具有时间(0-48h)、浓度(0-10ug/m L)依赖性,当5-FU浓度为1.25 ug/m L,作用时间为24h时胃癌细胞增殖能力显著低于对照组(RPMI-1640完全培养基培养24h)(P=0.000),5-FU作用时间为48h时胃癌细胞增殖能力显著低于对照组(RPMI-1640完全培养基培养48h)(P=0.000)。2、当5-FU浓度为1.25 ug/m L,作用时间为48h,随着作用时间的延长自噬相关蛋白Beclin1相对表达量(0-24h)逐渐增高,到达24h出现高峰后逐渐降低;LC3Ⅱ/Ⅰ相对表达量(0-48h)逐渐增多;P62相对表达量(0-12h)逐渐增高,12h到达高峰后逐渐降低;凋亡相关蛋白Bax表达量(0-6h)逐渐升高,6h到达高峰后逐渐降低,Bcl-2相对表达量(0-48h)逐渐增高,Bcl-2/Bax比值12h开始高于对照组。3、当100n MBafilomycin A1联合1.25ug/m L5-FU作用于胃癌SGC-7901细胞24h,扫描电镜见5+B组与5-FU组相比自噬体大量堆积,自噬溶酶体显著减少;免疫组化见Beclin1平均光密度5+B组低于5-FU组,差别具有统计学意义(P=0.000);Western Blot见自噬相关蛋白LC3Ⅱ∕Ⅰ相对表达量5+B组高于5-FU组,差别具有统计学意义(P=0.000);P62相对表达量5+B组高于5-FU组,差别具有统计学意义(P=0.000);MTT法见细胞增殖能力5+B组低于5-FU组,差别具有统计学意义(P=0.004);迁移实验见迁移细胞5+B组少于5-FU组,差别具有统计学意义(P=0.000);侵袭实验见侵袭细胞数5+B组(51.00±5.83个/视野)少于5-FU组(103.33±4.53个/视野),差别具有统计学意义(P=0.001);凋亡率5+B组高于5-FU组,差别具有统计学意义(P=0.000);Western Blot见促凋亡蛋白Bax相对表达量5+B组高于5-FU组,差别具有统计学意义(P=0.000);抗凋亡蛋白Bcl-2相对表达量5+B组低于5-FU组,差别具有统计学意义(P=0.000),Bcl-2/Bax比值5+B组低于5-FU组,差别具有统计学差异(P=0.000)。4、当100n MBafilomycin A1作用于胃癌SGC-7901细胞24h,扫描电镜见BAF组与Control组相比自噬体堆积,自噬溶酶体减少;免疫组化见Beclin1平均光密度BAF组显著低于Control组,差别具有统计学意义(P=0.008);Western Blot见自噬相关蛋白LC3Ⅱ∕Ⅰ相对表达量BAF组高于Control组,差别具有统计学意义(P=0.000);P62相对表达量BAF组高于Control组,差别具有统计学意义(P=0.000);MTT法见细胞增殖能力BAF组低于Control组,差别具有统计学意义(P=0.000);迁移实验见迁移细胞数BAF组少于Control组,差别具有统计学意义(P=0.000);侵袭实验见侵袭细胞数BAF组少于Control组,差别具有统计学意义(P=0.000);凋亡率BAF组高于Control组,差别具有统计学意义(P=0.000);Western Blot见促凋亡蛋白Bax相对表达量BAF组高于Control组,差别具有统计学意义(P=0.005);抗凋亡蛋白Bcl-2相对表达量BAF组低于Control组,差别具有统计学意义(P=0.046),Bcl-2/Bax比值BAF组低于Control组,差别具有统计学意义(P=0.000)。结论:1、5-FU可诱导胃癌SGC-7901细胞产生保护性自噬,提高其对5-FU的抵抗能力。2、Bafilomycin A1能够抑制5-FU诱导胃癌SGC-7901细胞产生的保护性自噬,提高胃癌SGC-7901细胞对5-FU的敏感性。3、Bafilomycin A1能够抑制胃癌SGC-7901细胞正常水平自噬,抑制自噬后其增殖及侵袭转移能力降低,凋亡率提高,Bafilomycin A1促进凋亡可能与抑制自噬后Bcl-2表达降低,Bax表达升高有关。